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目的:本实验以C57BL/6小鼠和人脐静脉内皮细胞作为研究对象,探讨甲基莲心碱(Nef)对ARDS中肺损伤的保护作用及机制。方法:1.体内实验:将健康雄性C57BL/6小鼠(周龄:8-10周)随机分为四组,分别为:Control组、LPS组、LPS+Nef组、Nef组。LPS+Nef组和Nef组小鼠每天给予Nef溶液20 mg/kg/d灌胃处理,Control组和LPS组小鼠接受同等剂量的生理盐水灌胃处理。每组小鼠均连续给予灌胃处理各7天。末次灌胃处理2 h后,给予LPS组和LPS+Nef组小鼠LPS(20 mg/kg)腹腔注射建立小鼠ARDS损伤模型,Control组和Nef组小鼠接受同等剂量的生理盐水腹腔注射。留取小鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液、血清用于进一步研究。应用苏木精-伊红染色技术观察肺组织病理形态的改变;应用伊文思蓝染色技术检测肺毛细血管通透性改变;应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织中MDA、SOD水平变化:肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;应用Western blot技术测定LPS诱导下NF-KB信号通路中关键调节蛋白(NF-kB/P65、IkBα/p-Ik Bα)水平及活化状态;应用荧光探针示踪法检测小鼠肺组织中活性氧(ROS)的含量改变;运用组织免疫荧光技术检测肺毛细血管内皮细胞多糖包被表达量改变。2.体外实验:应用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为本课题的研究对象。①Control组、LPS组、LPS+Nef组、Nef组。LPS+Nef组和Nef组分别应用Nef溶液(10μM)预处理1 h,Control组和LPS组应用等剂量的不完全培养基。随后LPS组和LPS+Nef组分别给予LPS(1μg/m)处理6h 作用6 h后,应用荧光探针检测细胞中ROS和线粒体中活性氧(mtROS)水平的变化;运用细胞免疫荧光技术检测内皮细胞多糖包被含量变化;应ELISA技术检测每一实验组中MDA、SOD水平变化。结果:Neferine能够明显改善LPS诱导的ARDS中肺组织病理学改变,减轻肺水肿程度,减轻肺毛细血管的通透性,降低炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10)的生成,抑制LPS诱导的ARDS小鼠中NF-kB信号通路的活化。研究进一步从体内实验和体外实验证明,Nef可以保护多糖包被的降解,这一效应可能与Nef抑制线粒体ROS产生,减少氧化应激有关。结论:Neferine通过抑制线粒体活性氧保护LPS诱导的ARDS中内皮细胞多糖包被的损伤。