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外阴阴道假丝酵母菌病菌种分型及药敏研究目的:由念珠菌引起的临床感染菌株进行分离培养鉴定,研究长春外阴阴道念珠菌临床分离株的流行病学特点,监测其对常见抗真菌药物的耐药性，为临床合理用药提供依据。方法:将收集来的阴道分泌物用沙堡氏琼脂培养基培养,分离纯化菌株,挑取典型菌落,制成菌悬液后,用CHROMagar显色培养基进行菌株鉴定，同时挑取典型菌落按照美国国家临床试验标准化研究所(CLSI)推荐的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案第二版》(M27-A2)方案测定212株白色假丝酵母菌对氟康唑，伊曲康唑，两性霉素B及伏立康唑四种抗真菌药物的敏感性。结果:2013年2月-2013年10月共分离出302株假丝酵母菌,其中RVVC组92株,VVC组210株,其中，白假丝酵母菌212，占70.2%；光滑假丝酵母菌28株，占9.27%；热带假丝酵母菌22株，占7.28%；克柔假丝酵母菌14株，占4.64%；近平滑假丝酵母菌13株，占4.3%其他菌种为3株，占0.99%，混合9株，占2.98%。其中RVVC组92株中有53株为白色假丝酵母菌,占57.6%(53/92)，非白色假丝酵母菌42.4%;VVC组210株中有159株为白色假丝酵母菌,占75.7%(159/210),非白色假丝酵母菌24.3%。RVVC组非白色假丝酵母菌所占比例与VVC组差异有统计学意义(P<.005),RVVC组非白色假丝酵母菌比例高。212株白色假丝酵母菌中，氟康唑耐药株为18株，耐药率为8.49%；氟康唑剂量依赖敏感株12株，占5.66%，；敏感株182株，敏感率为85.84%。伊曲康唑耐药株为8株，耐药率为3.78%；伊曲康唑剂量依赖敏感株4株，占1.89%；敏感株200株，敏感率为94.34%。两性霉素B耐药株为5株，耐药率为2.36%；两性霉素B剂量依赖敏感株3株，占1.42%；敏感株204株，敏感率为96.23%。伏立康唑耐药株为9株，耐药率为4.24%；伏立康唑剂量依赖敏感株4株，占1.89%；敏感株199株，敏感率为93.87%。结论：1.白色念珠菌仍是VVC，RVVC的主要致病菌,RVVC组病人非白色假丝酵母菌比例高于VVC组,非白色假丝酵母菌中以光滑假丝酵母菌比例最高。2.假丝酵母菌对两性霉素B的敏感性最高,唑类药物中以伊曲康唑敏感性最高,氟康唑耐药性最高,RVVC组假丝酵母菌对氟康唑的敏感率明显低于VVC组。唑类耐药白假丝酵母菌ERG11基因突变分析目的:分析白念珠菌对唑类耐药临床分离株ERG11的基因突变，并探讨与耐药的关系。方法:采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)公布的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案6(M一27方案)测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑，两性霉素，伏立康唑的MIC,选择白假丝酵母菌耐药株(FLZ＞64ug/m1,ITZ＞lug/m1，两性霉素＞4，伏立康唑＞4)和敏感对照株(FLZ MIC《8ug/ml,ITZ MIC《0.125ug/m1，两性霉素MIC《1ug/ml,伏立康唑MIC《1ug/ml。纯培养扩增目的菌株,提取其基因组DNA，利用DNA Primer软件辅助设计一对PCR引物，以提取的目的DNA为模板,扩增ERGll基因全序列,扩增后的PCR产物经纯化后测序,将测序结果与GenBank中己知标准序列(X13296)进行比较分析。结果:电泳图像显示,获得PCR产物大小与预期结果一致，测序结果表明,成功获得了白色念珠菌耐药株ERG11基因全序列，与GenBank中标准株(X13296)序列比较表明,耐药株都存在错义突变和无义；共有50个碱基突变位点,其中,有24个位点是无义突变，与以往报道相同的突变位点有12个,F72L，Dll6E，All4S，Y132H，E266D，V4371，G465S，K128T，Y257H，G448E，K342R和G464S,而其余14个位点D288G，G234V，T123I，N168S，K344E，R523G，A317T，I333T，T285A，K90R，N237D，R523G，S24I， E260G未见报道。结论:耐唑类抗真菌药物的白色念珠菌ERGll基因具有错义突变，某些突变可能与药物抗性相关联，其中14个新发现的突变位点在其耐药性中的意义尚不明确，需进一步研究。