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第一部分胆碱与帕瑞昔布钠在急性醋酸扭体模型中的协同镇痛作用其机制目的探讨胆碱和帕瑞昔布钠在镇痛中的互相作用并对其机制进行简单研究。方法醋酸扭体模型:昆明小鼠,150只,雄性,随机分为4组:(1)对照组(S)(n=10):尾静脉注射0.9%的生理盐水0.2mL/20g; (2)胆碱组(C) (n=50): 50只小鼠设立 5 个剂量即 3mg/kg、6mg/kg、12mg/kg、24mg/kg、48mg/kg; (3)特耐组(P )(n=50): 50 只小鼠设立 5 个剂量即 1.5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg、12mg/kg、24mg/kg; ( 4 )联合用药组(C+P)(n=40): 40只小鼠设立4个剂量,分别为两药ED50的1/2、1/4、1/8、1/16,进而可求出两药合用时的ED50。所有药物均在造模前经尾静脉给予。胆碱给药时间为造模前2h,帕瑞昔布钠为30min。研究生理盐水对照组(S)、ED50胆碱组(C)、ED50帕瑞昔布钠组(P)、以及1/2ED50胆碱和帕瑞昔布钠组[1/2(C+P)]对醋酸扭体模型小鼠血中细胞因子和炎症介质的影响。药物预处理时间同上,在腹腔给予醋酸后1Omin立即实施摘眼球采血。所采血液采用ELISA试剂盒检测 IL-1、TNF-α、PGE2、NF-kB、I-kB 的含量。结果(1 )醋酸扭体模型中,胆碱和帕瑞昔布钠单独经尾静脉给药后所得的ED50,胆碱8.64mg/kg,帕瑞昔布钠6.33mg/kg;二者联合用药时胆碱为2.13mg/kg,帕瑞昔布钠为1.56mg/kg。(2)在等辐射图见胆碱与帕瑞昔布钠合用时的ED50实测值落在理论值的下方,两点作t检验的P<0.05。联合用药指数CI<0.9。( 3 )与S组比较,C组、P组、1/2 (C+P)组中IL-1、TNF-α的含量均降低(P<0.05),且1/2(C+P )组比C组及P组分别单独使用降低更加明显(P<0.05 ); P组以及1/2( C+P )组中PGE2含量较对照组均有降低(P<0.05 ),1/2 (C+P )组与C组相比PGE2含量下降更多(P<0.05);与S组相比,NF-kB的含量在C组、P组、1/2(C+P)组中均降低(P<0.05),I-kB的含量在1/2 (C+P)组及C组中出现有统计学意义的降低,NF-kB、I-kB在1/2 (C+P)组中较P组有更明显降低(P<0.05)。小结胆碱与帕瑞昔布钠共同作用于急性醋酸扭体模型中较两药分别使用,可以增加镇痛效果,并减少单药使用剂量,同时更好地降低血中炎症因子的含量。第二部分胆碱与帕瑞昔布钠联合应用对CCI大鼠的镇痛效应目的观察胆碱与帕瑞昔布钠对慢性坐骨神经损伤神经病理性疼痛模型(CCI)大鼠的镇痛效应及脊髓HMGB1蛋白与NF-κBp65的表达,并对其可能的机制进行探讨。方法1.健康雄性SD大鼠,体重180-220g,随机分为5组(n=8),生理盐水治疗假手术组(sham组)大鼠腹腔注射相同容量的0.9%氯化钠溶液;生理盐水治疗CCI组(CCI+saline组)大鼠腹腔注射相同容量的0.9%氯化钠溶液;胆碱(cho)治疗CCI组大鼠腹腔注射胆碱6mg/kg,12mg/kg,24mg/kg;帕瑞昔布钠(pare)治疗CCI组大鼠腹腔注射帕瑞昔布钠3mg/kg,6mg/kg,12mg/kg;胆碱与帕瑞昔布钠联用治疗CCI组大鼠在确定无效剂量后,合用。各组均进行相应处理,并连续给药7天。所有大鼠均在术前、术后第3、5、7、10、14天进行测试。用药组在注射药物后30min测定大鼠的疼痛阈值。2.另取30只SD大鼠,分为5组,即sham 组,CCI+saline, CCI+choline 6mg/kg, CCI+parecoxib 3mg/kg, CCI+choline 6mg/kg+parecoxib3mg/kg,造模成功后,连续给药7天,每组随机选取5只大鼠取L4-6节段脊髓背根神经节,用Western blot检测HMGB1蛋白及NF-KBp65。结果1.胆碱12mg/kg和24mg/kg剂量与模型组相比能够显著减少机械性异常性疼痛及热痛觉过敏(P<0.05),而6mg/kg对CCI大鼠机械痛及热痛无明显作用(图1-2A);2.帕瑞昔布钠6mg/kg和12mg/kg与模型组相比均有明显的抗异常性疼痛的作用(P<0.05),但是3mg/kg没有观察到其抗异常性伤害的作用(图1-2B); 3.胆碱6mg/kg和帕瑞昔布钠3mg/kg联合应用于CCI模型较生理盐水治疗的模型组产生显著的抗伤害作用(P<0.05)(图3A-B); 4.胆碱与帕瑞昔布钠联合应用与模型组相比,其脊髓HMGB1蛋白及NF-κBp65的表达显著降低(P<0.05 )(图4)。小结在慢性神经病理性疼痛大鼠模型中,胆碱与帕瑞昔布钠分别在无痛剂量下联合使用表现出显著的抗机械痛及热痛的作用;同时脊髓HMGB 1蛋白及NF-κBp65的表达也显著降低。结论1.胆碱与帕瑞昔布钠分别单独使用能够降低急性醋酸扭体模型小鼠的扭体次数,且这一作用呈剂量依赖性。2.胆碱与帕瑞昔布钠在急性醋酸扭体模型中联合使用具有协同镇痛作用,二者的相互作用可能与体内NF-kB的表达有关。3.慢性神经病理性疼痛大鼠模型中,在一定剂量时,胆碱与帕瑞昔布钠分别单独使用可以减轻CCI引起的机械性疼痛与热痛觉过敏。4.胆碱与帕瑞昔布钠在非镇痛剂量联合使用可以有效的缓解神经病理性疼痛,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-KB通路有关。