支气管哮喘（简称哮喘）是一种高度异质性的慢性气道炎症性疾病。过敏性哮喘是其中最常见类型，由Th2细胞介导的呼吸道过敏反应，以呼吸道嗜酸粒细胞浸润、血清IgE升高、杯状细胞化生及黏液高分泌、气道重塑和气道高反应性（airway hyper-responsiveness,AHR）为特征。卫生假说提示：婴幼儿期接触病原菌的机会越少，长大后越易患过敏性疾病。新生期/婴幼儿期是过敏性疾病发病的重要“窗口期”，目前认为，该时期如果接触相应的病原体或病原成分（如脂多糖lipopolysaccharide，LPS），可重塑呼吸道的免疫功能，进而影响机体成年后对呼吸道过敏原的反应。　　目的：　　1.建立鸡卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）诱导的过敏性哮喘模型；　　2.研究新生期或成年期LPS暴露，对后续OVA诱导的过敏性呼吸道炎症的影响。　　方法：　　1.建立OVA诱导的过敏性哮喘模型。致敏阶段：BALB/c小鼠于第0天和第7天经腹腔注射卵清白蛋白（OVA）与佐剂[氢氧化铝AL(OH)3，alunminum,alum]的混悬液（含有20μg OVA和4mg Alum的100μl生理盐水）；发敏阶段：第14天开始雾化吸入1%OVA溶液，每天雾化30min，分别连续雾化3天、5天和7天，对照组雾化相同时间的生理盐水，最后一次雾化24h后，获取支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）细胞进行瑞氏-姬姆萨染色和分类计数；肺组织切片行高碘酸希夫染色（periodic Acid-Schiff stain，PAS）及苏木精-伊红染色（hematoxylin-sosin staining，H&E），观察杯状细胞化生及炎性细胞浸润情况并进行病理评分；ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平以及血清中IgE、IgG1和IgG2a水平；最后应用小动物肺功能仪检测气道高反应性（AHR）；　　2.为研究LPS暴露对后续OVA诱导的过敏性呼吸道炎症的影响，将LPS（100ng）每隔1天经鼻给予新生鼠（≤7天）和成年鼠（7周龄），共6次，对照组给予同等量的生理盐水。间隔3周后，OVA致敏并诱导过敏性哮喘模型，检测指标同上。此外，部分肺组织经胶原酶D消化后制备单细胞悬液，采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测肺脏嗜酸粒细胞、肺间质巨噬细胞（interstitial macrophage，IM）、树突状细胞（dendritic cell，DC）亚群及Treg细胞的组成；分离获取支气管旁淋巴结（peribronchial lymph nodes，PBLN）细胞，体外与OVA共培养3天，ELISA检测培养上清中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10和IFN-γ的水平；　　3.采用FCM比较新生鼠和成年鼠稳态下肺组织上皮细胞，肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage，AM）、IM及DC表面LPS受体TLR4的表达；　　4.为进一步研究LPS的可能作用机制，将LPS（100ng）每隔1天经鼻给予新生鼠或成年鼠，共6次，对照组给予同等量的生理盐水。最后一次LPS处理24h后，FCM检测小鼠肺脏组织中AM、IM及Treg和DC亚群的组成和表型。　　结果：　　1.与阴性对照组相比，OVA雾化5天和7天的小鼠出现典型呼吸道哮喘样反应，表现为BALF中嗜酸粒细胞数明显增加（p＜0.05），BALF中Th2相关的细胞因子（IL-4、IL-5和IL-13）水平明显升高（p＜0.05），血清IgE和IgG1水平明显增加（p＜0.01），杯状细胞化生和黏液分泌（p＜0.001），且雾化5天小鼠出现气道高反应性（p＜0.01）。雾化3d小鼠仅出现嗜酸粒细胞增加、IL-5和IL-13水平升高；　　2.新生期和成年期LPS预处理均可明显抑制OVA诱导的过敏性呼吸道炎症，新生期LPS处理后，其杯状细胞化生及BALF中Th2型细胞因子水平均明显低于成年期LPS处理组(p＜0.05)；LPS预处理可明显降低血清中IgE和IgG1水平（p＜0.05），但两年龄组之间无差异；　　3.两年龄组小鼠经OVA激发后，出现典型嗜酸粒细胞浸润，肺组织中浸润的cDC数目亦明显增加（p＜0.05），伴随GM-CSF和CCL-20的水平升高（p＜0.05），LPS预处理组则明显低于阳性组；成年鼠经OVA激发后，其肺组织中IM和Treg数目均明显增加（p＜0.05），LPS预处理组则明显低于阳性组（p＜0.05）；新生组阳性小鼠仅IM数目升高（p＜0.05），但LPS预处理对之无影响；　　4.PBLN细胞与OVA共培养上清中的IL-4、IL-5和IL-13的水平在阳性组均明显升高（p＜0.05），LPS预处理组则明显低于阳性组（p＜0.05）；阳性组IL-10水平明显高于阴性组（p＜0.01），新生期LPS预处理可进一步升高（p＜0.01），而成年期LPS预处理则明显低于阳性组（p＜0.001）；各组间IFN-γ水平无变化；　　5.稳态下，新生鼠肺脏上皮细胞和cDC2细胞表面TLR4的表达低于成年鼠（p＜0.05），而AM和IM细胞表面TLR4的表达高于成年鼠（p＜0.05）；　　6.新生期LPS处理导致肺组织中具有调节功能的IM和Treg细胞数明显升高（p＜0.01），而成年期LPS处理组仅IM细胞数增加（p＜0.05）；　　7.新生期LPS处理可增加肺组织cDC2的数目（p＜0.001），降低cDC2表面共刺激分子（MHC II、CD86和OX40L）的表达（p＜0.05），对cDC1无影响，成年期LPS处理可降低cDC2表面OX40L的表达。　　结论：　　1.成功建立了OVA诱导的BALB/c小鼠过敏性哮喘模型；　　2.新生期和成年期LPS预处理均可抑制OVA诱导的过敏性呼吸道炎症的发生发展，但其作用机制可能不同；　　3.稳态下，新生鼠与成年鼠肺脏上皮细胞、cDC2、AM和IM细胞表面TLR4表达水平不同；　　4.新生期和成年期LPS预处理可诱导肺组织中具有调节功能的细胞数目增加；　　5.新生期和成年期LPS处理可影响cDC2的数目或表型。