论文部分内容阅读
目的:研究显示电刺激腹侧被盖区(VTA)多巴胺神经元可以加速实验动物从丙泊酚、异氟醚全身麻醉苏醒,说明大脑中多巴胺能通路在促全身麻醉苏醒中有重要作用。中脑导水管腹侧周围灰质区(v PAG)是脑内重要的多巴胺能神经核团,且参与睡眠行为。但vPAG区多巴胺神经元是否也参与了全身麻醉过程,尚不清楚。故本实验借助活体脑区毁损和离体脑片膜片钳技术,观察损毁vPAG区多巴胺神经元对丙泊酚诱导的大鼠翻正反射消失时间(LORR)和翻正反射恢复时间(RORR)的影响;并且以自发兴奋性突触后电流(sEPSC)与自发抑制性突触后电流(sIPSC)为指标,观察丙泊酚对vPAG区多巴胺神经元突触传递的影响。观察丙泊酚对vPAG核团多巴胺神经元的影响,探讨vPAG核团多巴胺神经元在丙泊酚麻醉中的作用及机制,为全麻机制研究提供新思路。方法:本实验分为两部分,第一部分:选取健康雄性SD大鼠,随机分为两组,vPAG损毁组和非vPAG损毁组。损毁组:左侧vPAG核团位点内注入1μl 6-OHDA(4μg/μl),非损毁组注入等量生理盐水,每组30只,建模成功后待大鼠恢复14天后开始实验。每天按照4、5、6、7、8、9、10、11 mg/kg剂量尾静脉给予丙泊酚,观察大鼠翻正反射是否消失,记录每个剂量下损毁组和非损毁组大鼠翻正反射消失百分比,确定最佳丙泊酚输注剂量,每组10只。重新选取损毁组和未损毁组大鼠,每组20只,以11mg/kg尾静脉注射丙泊酚,观察其翻正反射消失时间(LORR)和翻正反射恢复时间(RORR)。第二部分:选取7-14天的SD大鼠,制备含vPAG核团的离体脑片,利用免疫荧光方法,鉴别多巴胺神经元。采用全细胞记录模式,在电压钳下分别记录丙泊酚(10μM)对vPAG核团多巴胺神经元sEPSC和sIPSC的影响(n=6)。结果:(1)损毁组与非损毁组相比,翻正反射消失时间明显缩短(P<0.05);(2)损毁组与非损毁组相比,翻正反射恢复时间明显延长(P<0.05);(3)与非损毁组相比,损毁组大鼠意识消失累计剂量反应曲线左移;(4)丙泊酚(10μM)增加sIPSC的频率(P<0.05),延长decay time(P<0.05),对幅度无明显影响;(5)丙泊酚(10μM)降低sEPSC的频率(P<0.05),对幅度和decay time无明显影响。结论:(1)损毁vPAG区多巴胺神经元可缩短麻醉诱导时间,延长麻醉苏醒时间,说明vPAG区多巴胺神经元参与了丙泊酚麻醉过程。(2)丙泊酚可能通过增加多巴胺神经元突触前膜GABA的释放和突触后膜GABAA受体的敏感性,减少突触前膜谷氨酸的释放抑制多巴胺神经元活性,导致意识消失。