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新生血管形成是直径超过0.5-1mm实体瘤生长和转移所必需。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一个血管内皮细胞的促分裂原和新生血管形成因子，它结合酪氨酸激酶受体KDR／FLK1和FLT-1能促进新生血管形成。筛选封闭VEGF与其受体KDR／FLT-1相互作用的小肽可以通过阻断新生血管形成而抑制实体瘤生长和转移。 既往以具有生物学活性的VEGF可溶性受体FLT-1、KDR为靶分子，通过生物淘筛(Bio-panning)从噬菌体展示12肽库中筛选获得了一个能与KDR结合的阳性克隆K237和两个能与FLT-1结合的阳性克隆F56、F90。本实验根据小肽K237、F56、F90的氨基酸序列合成了相应的核苷酸片段，然后将其克隆到二氢叶酸还原酶(DHFR)原核表达载体pQE42中，在大肠杆菌M15中稳定表达二氢叶酸还原酶融合蛋白DHFR-K237／F56／F90；经变性、复性同步纯化后得到纯度达90％的可溶性蛋白。 酶联免疫吸附法显示，DHFR-F56／F90能与可溶性受体FLT-1结合、DHFR-K237能与可溶性受体KDR结合；免疫细胞化学实验表明，DHFR-F56／F90／K237能与人脐静脉内皮细胞结合。竞争抑制实验显示，DHFR-F56和合成小肽F56能竞争抑制VEGF结合FLT-1，DHFR-K237和合成小肽K237能竞争抑制VEGF结合KDR；~3HTdR掺入实验表明DHFR-K237和合成小肽K237能显著抑制由VEGF刺激而引起的人脐静脉内皮细胞增殖。鸡胚尿囊膜血管增生抑制实验表明，DHFR-F56／K237及合成小肽F56、K237能显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成。BALB／c裸鼠成瘤实验显示小肽融合蛋白DHFR-F56与DHFR-K237能显著抑制荷瘤裸鼠中肿瘤的生长和促进肿瘤组织坏死，且免疫组织化学实验提示DHFR-F56能定位于肿瘤部位与人胃癌MGC803细胞结合。SCID小鼠成瘤实验显示合成小肽F56、K237能显著抑制荷瘤裸鼠中肿瘤