【摘 要】
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目的:近年来,扩心病(Dilated Cardiomyopathy,DCM)的发病率逐渐增加,尚缺乏特异的治疗手段,5年生存率较低。在心肌细胞发育的基础研究中,PHC1(polyhomeotic homolog1)基因在
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目的:近年来,扩心病(Dilated Cardiomyopathy,DCM)的发病率逐渐增加,尚缺乏特异的治疗手段,5年生存率较低。在心肌细胞发育的基础研究中,PHC1(polyhomeotic homolog1)基因在心脏形态学发育及扩心病发生发展中扮演着重要的角色。本实验通过携带sh RNA-PHC1质粒的慢病毒感染人胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESC)的方法,以获得敲降PHC1基因的ESC系,为下一步明确扩心病的病理机制奠定基础,为临床上扩心病诊疗提供理论依据。方法:本实验sh RNA-PHC1质粒分为sh RNA1、sh RNA2两个实验组,具有嘌呤霉素抗性;使用慢病毒载体包装sh RNA1、sh RNA2及control质粒,与高效转染试剂混合转染293T细胞,收集并浓缩病毒后感染人ESC,3天后加入嘌呤霉素,第6天通过RNA提取,逆转录,PCR扩增行3%琼脂糖电泳、q PCR定量、WB及细胞周期分析检测是否成功获得敲降PHC1的人ESC系。结果:(1)构建的shRNA-PHC1基因序列能有效沉默人ESC内的PHC1;(2)沉默PHC1基因能使人ESC增殖速度减慢,细胞周期的G0期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05)。结论:PHC1基因水平下降可使人ESC的增殖分裂能力下降。
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