随着经济的高速发展和环境的恶劣变化,人们对环境保护意识有所提高。邻苯醌和儿茶酚化合物可广泛应用于医药、环境、化工、传感器、材料等多个领域,特别是在高分子聚合、接枝、改性以及功能化等方面有着重要的应用,可作为船体的的抗生物垢涂层,但伴随着其生产和应用过程中带来的污染,越来越引起人们的关注。工业上主要通过化学方法解决此类问题,而近年来发现酪氨酸酶具有催化单酚化合物和儿茶酚化合物的双重活性,既能直接合成邻苯醌化合物又能合成儿茶酚化合物,因此发掘大量高效的酪氨酸酶,用于催化法合成邻苯醌和儿茶酚化合物具有广阔的前景,是当下的一个研究热点。本课题根据NCBI数据库收录的酪氨酸酶信息,选取大墩榛蘑的酪氨酸酶(Ao tyr)基因,利用基因工程技术将其构建到原核表达载体pET28a上,随后导入到大肠杆菌pGro7/BL21(DE3)中实现共表达,利用Ni金属亲和层析方法进行纯化。比较了不同催化体系和条件对酶催化反应效率的影响,并用高效液相色谱和四极杆飞行质谱表征Ao tyr催化不同酚类化合物的产物,验证此反应在合成邻苯醌化合物应用上的可行性。最后研究了在抗坏血酸的存在下,Ao tyr催化对叔丁基苯酚合成对叔丁基邻苯二酚,同样方法表征,初步探索了此反应在儿茶酚化合物合成应用上的可行性。研究结果表明:制备的大量较纯的Ao tyr具有催化活性,且催化活性高于商业化酪氨酸酶;不需预处理的Ao tyr在含5 mmol/LSDS的水相胶束体系中,25℃ pH 5.0时,催化效率最高;对催化产物的表征结果表明苯酚、2-氟-4-甲基苯酚、2,4-二甲基苯酚、3,4-二甲基苯酚、2,3,5-二甲基苯酚能被催化成相应的邻苯醌化合物;对叔丁基苯酚的催化反应体系中加入1 mmol/L的抗坏血酸能够抑制对叔丁基邻苯醌的生成,提高对叔丁基邻苯二酚的产率。