论文部分内容阅读
背景:内毒素休克是由革兰氏阴性菌大量死亡后释放入血的内毒素引起的小血管舒缩功能紊乱,进而导致患者微循环发生障碍,临床表现为动脉血压降低、组织持续低灌注、微循环功能发生衰竭、代谢性酸中毒等,发生内毒素休克时肺脏是极易受损的靶器官。当机体发生内毒素休克时,肺脏组织极易受损迁延乃至诱发肺损伤,若不及时防治可在短时间内迁延发展为急性呼吸窘迫综合症,甚至发生多器官功能衰竭综合症(MODS),是造成临床危重症患者死亡的主要原因之一。目前临床上尚无特异性的治疗能有效地改善预后并降低其致死率。电针刺是以中国传统医学针灸为基础发展起来的,施针刺入相关穴位后,给予一定电流刺激,并且通过改变电流刺激的强度、频率以及间隔时间等参数从而产生行针治疗的效果。前期实验表明,当使用电针刺激足三里穴(ST36)和肺俞穴(BL13)时,肺组织Nrf2蛋白表达增加且核转位增多,从而使肺脏组织血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)表达增加,使得内毒素休克兔肺组织损伤程度减轻。p38MAPK是细胞内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。它属于丝裂原活化蛋白激酶家族。p38MAPK激活后发生核转位,是传导真核细胞信号的重要通路之一。对于电针刺对兔内毒素休克致肺损伤中Keap1-Nrf2/ARE通路的影响是否通过p38MAPK产生作用,目前国内外尚无相关报道。目的:本研究通过观察不同组别内毒素休克致肺损伤兔模型中肺组织病理学评分、W/D、MDA含量及SOD活性以及肺组织中p38MAPK、磷酸化p38MAPK、Nrf2表达水平、细胞核内Nrf2蛋白的分布比率来明确Keap1-Nrf2/ARE通路在电针刺激足三里和肺俞穴减轻兔内毒素休克致肺损伤中的作用及其与p38MAPK通路之间的关系。方法:80只健康的清洁级新西兰大白兔,性别雄性,体重为1.5~2.0kg,2月龄,使用随机数字表法随机进行分组,将其分成8组(n=10):对照组(C组)、p38MAPK阻断剂SB203580组(S组)、内毒素休克组(M组)、内毒素休克+SB203580组(MS组)、电针刺穴位+内毒素休克组(EAM组)、电针刺穴位+内毒素休克+SB203580组(EAMS组)、电针刺非穴位+内毒素休克组(SEAM组)、电针刺非穴位+内毒素休克+SB203580组(SEAMS组)。EAM组和EAMS组使用电针刺刺激足三里穴以及肺俞穴,使用疏密波,频率为2-100hz,强度以使兔产生轻微肌颤搐为宜,每天一次,持续30分钟,连续进行5天(1~4天施行电针刺预处理),在实验当天从静脉注射脂多糖(lps)开始持续给予电针刺刺激,直至处死兔子。seam组与seams组使用同样的频率以及强度电针刺穴位旁开0.5cm处进行预处理。m组、ms组、eam组、seam组、seams组经耳缘静脉注射lps5mg/kg(溶于2ml生理盐水),其余各组给予等量的生理盐水。静脉注射lps后2小时以内,平均动脉压下降至基础值75%以下,即可认为模型建立成功。内毒素休克模型建立成功之后,s组、eams组、seams组经静脉注射sb2035805μmol/kg(溶于0.5ml无水乙醇),其余组注射无水乙醇0.5ml。实验开始6小时后,经颈动脉采集动脉血行血气分析,后放血处死兔子,取肺脏组织进行病理学观察并予以评分,计算肺组织干湿重比,检测肺组织mda含量以及sod活性,检测p38mapk以及p-p38mapk、nrf2mrna以及nrf2核蛋白和总蛋白的表达水平,检测nrf2的分布比率。结果:(1)肺组织病理学评分:与c组相比,s组肺组织损伤评分无统计学意义(p>0.05),其余各组肺组织损伤评分均增加(p<0.05);与m组相比,ms组、seam组、seams组肺组织损伤评分差异无统计学意义(p>0.05),eam组、eams组肺组织损伤评分降低(p<0.05);与eam组相比较,eams组肺组织损伤评分增加(p<0.05)。(2)肺组织w/d:与c组相比,s组差异无统计学意义(p>0.05),其余各组肺组织w/d值均增加(p<0.05);与m组相比,ms组、seams组w/d值差异无统计学意义(p>0.05),eam组、eams组肺组织w/d降低(p<0.05);与eam组相比,eams组肺组织w/d增加(p<0.05)。(3)肺组织mda含量以及sod活性:与c组相比,s组mda含量以及sod活性差异无统计学意义(p>0.05),其余各组mda含量增加且sod活性降低(p<0.05);与m组相比,ms组、eams组、seam组、seams组mda含量以及sod活性差异无统计学意义(p>0.05),eam组mda含量降低,sod活性显著增加(p<0.05);与eam组比较,eams组mda含量增加,sod活性降低(p<0.05)。(4)p38以及p-p38蛋白的表达:与c组相比,s组p38以及p-p38差异无统计学意义(p>0.05),其余各组p38以及p-p38表达均上调(p<0.05);与m组相比较,eam组、eams组p38以及p-p38表达上调(p<0.05);与eam组相比,eams组p38以及p-p38表达降低(p<0.05)。(5)nrf2mrna:与c组比较,s组表达水平无统计学意义(p>0.05),其余各组Nrf2 mRNA的表达水平上调(P<0.05);与M组比较,EAM组Nrf2 mRNA的表达水平上调(P<0.05),而SEAM组、EAMS组以及SEAMS组的Nrf2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。(6)Nrf2核蛋白:与C组比较,S组Nrf2核蛋白无统计学意义(P>0.05),其余各组表达上调(P<0.05);与M组相比较,MS组、EAM组、EAMS组Nrf2核蛋白表达上调(P<0.05),而SEAM组、SEAMS组Nrf2核蛋白无统计学意义(P>0.05);与EAM组相比较,EAMS组Nrf2核蛋白表达减少(P<0.05)。(7)Nrf2总蛋白:与C组相比,EAM组、EAMS组以及SEAM组Nrf2总蛋白表达增加(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05);与M组相比较,EAM、EAMS组Nrf2总蛋白表达增加(P<0.05);与EAM组相比,EAMS组Nrf2总蛋白降低(P<0.05)。(8)细胞核内Nrf2蛋白的分布比率:与C组相比,S组细胞核内Nrf2蛋白的分布比率无统计学意义(P>0.05),其余各组Nrf2分布比率增加(P<0.05);与M组相比较,EAM组、EAMS组Nrf2蛋白分布比率增加(P<0.05),SEAM组、SEAMS组Nrf2蛋白分布比率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Keap1-Nrf2/ARE通路在电针刺减轻兔内毒素休克诱导肺损伤中的保护作用与p38MAPK使Nrf2蛋白磷酸化进而促进其核转位有关系。