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背景和目的：多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiform, GBM)是星形细胞瘤中恶性程度最高的胶质瘤,属WHOⅣ级。GBM生长速度快、中位生存时间短。放疗是GBM主要的治疗手段之一,用于术后杀死剩余肿瘤细胞,然而,GBM对放疗的抵抗限制了其治疗效果。Nrf2是对氧化还原反应敏感的一个转录因子,调节抗氧化酶及一些抗凋亡蛋白的表达,有抗氧化与凋亡的细胞保护作用。Nrf2-ARE信号通路主要维持细胞氧化还原平衡,防御环境污染和致癌物刺激。然而Nrf2对肿瘤细胞也有保护作用。Nrf2可以降低化疗药物的敏感性这点已经比较明确。那么我们本研究的着手点就是看Nrf2是否与放疗的抵抗有关。通过探讨Nrf2抑制与上调后分别对体外人U251胶质瘤细胞1OGy单次放疗后的影响,观察细胞的增殖与调亡。因此,研究Nrf2与放疗的关系,有助于为临床上GBM的治疗提供新的思路。实验目的：1、观察对体外人U251胶质瘤细胞行1OGy单次放疗后Nrf2的变化情况；2、探讨Nrf2抑制与上调后分别对体外人U251胶质瘤细胞lOGy单次放疗后的影响,观察细胞的调亡；3、对放疗前后的人胶质母细胞瘤手术病理标本行免疫组化,观察其中Nrf2的分布及变化情况。材料和方法：1、放射：选取10Gy对体外人U251胶质瘤细胞进行放射,以未放射细胞作为对照组,放射后选取3h,6h,12h,24h为时间点使用real time RT-PCR测定Nrf2的表达；2、质粒转染：分为4个组：①脂质体组(lipofectamine2000组)：U251细胞+lipo2000②空质粒组(pEGFP组)：U251细胞+lipo2000+pEGFP③Nrf2抑制组(Si-Nrf2组)：U251细胞+lipo2000+si-Nrf2④Nrf2上调组(pEGFP-Nrf2组)：U251细胞+lipo2000+pEGFP-Nrf2测定方法：在质粒转染48h后使用流式细胞仪观察细胞凋亡率3、X-Ray照射：分为4个组,在质粒转染48h后均进行照射,10Gy:①脂质体组(lipofectamine2000组)：U251细胞+1ipo2000②空质粒组(pEGFP组)：U251细胞+lipo2000+pEGFP③Nrf2抑制组(Si-Nrf2组)：U251细胞+lipo2000+si-Nrf2④Nrf2上调组(pEGFP-Nrf2组)：U251细胞+lipo2000+pEGFP-Nrf2测定方法：在照射完毕8h后使用流式细胞仪观察细胞凋亡率4、在南京军区南京总医院胶质母细胞瘤病理标本中,选取放疗前后的病理标本共14例,其中放疗前8例,放疗后6例,行免疫组化Nrf2染色,观察放疗前后Nrf2的分布及表达变化。结果1、对U251人胶质瘤细胞进行10Gy放疗后,其Nrf2的mRNA相对定量由未进行放疗时的0.0319,变为3h后0.0266,6h为0.0207,12h为0.0216,24h后为0.0288。6小时Nrf2的mRNA值较初始值明显下降,p<0.01；12小时Nrf2的mRNA值较初始值下降,p<0.05；2、进行质粒转染48h后,行流式细胞仪检测。Lipo组凋亡率为0.06%,空质粒组为1.08%, Nrf2上调组为0.06%,Nrf2抑制组为1.39%。其差别具有统计学意义；3、进行质粒转染48h后,进行10Gy放疗后8h行流式细胞仪检测。Lipo组凋亡率为0.386667%,空质粒组为3.40333%, Nrf2上调组为1.55%, Nrf2抑制组为4.23667%。其差别具有统计学意义;4、在胶质母细胞瘤进行放疗后的病理标本中,较放疗前比较,可见Nrf2表达明显增加,并在胞质与胞核中表达均有增加,在胞质中增加尤为明显。结论1、放疗在24h内对U251人胶质瘤细胞中Nrf2有抑制作用,其变化与放疗后时间有一定关系；2、Nrf2在U251人胶质瘤细胞的放疗中起到保护作用,抑制时细胞凋亡增加,上调时细胞凋亡减少；3、胶质母细胞瘤病人行放疗后其Nrf2的表达无论在胞质与胞核中均增加明显,在胞质中增加尤为明显。