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由芸薹生链格孢菌引起的黑斑病是十字花科蔬菜生产上的重要病害之一,常造成严重的经济损失。我们早期研究结果显示,芸薹生链格孢的AbFus3-MAPK信号途径在其致病性过程中起着重要的调控作用。本文在前期研究的基础上,通过MAPKK激酶AbSte7序列分析显示其存在两个符合MAPK停泊的共有序列(D1和D2)。利用重叠PCR技术构建了D1和D2缺失突变体,分别研究了D1和D2在MAPK停泊中的作用。本文主要结果如下: 1.以pCB1532为骨架质粒,构建了AbSte7基因的互补载体;以氯嘧磺隆为筛选标记,成功互补了△AbSte7。进一步比对了野生菌、△AbSte7和△AbSte7互补体的菌落形态、菌丝特征、分生孢子性状、致病性以及黑色素产量,研究结果显示△AbSte7互补体的上述性状都恢复到野生菌水平上,说明实现了△AbSte7的AbSte7基因的成功互补。 2.利用重叠PCR技术分别扩增得到了D1位点和D2位点缺失的AbSte7基因-AbSte7△D1和AbSte7△D2,以pCB1532为骨架质粒,构建了AbSte7△D1和AbSte7△D2基因的互补载体;转化△AbSte7的原生质体,利用氯嘧磺隆为筛选标记,得到了△AbSte7/AbSte7△D1和△AbSte7/AbSte7△D2互补体。反转录PCR技术显示AbSte7基因在两个互补体中均正常表达,但菌落形态、菌丝特征、分生孢子性状、致病性以及黑色素产量的比对分析显示,D1位点和D2位点缺失的AbSte7基因分别互补△AbSte7后,两个互补体均无法恢复野生菌的性状,结合RT-PCR的AbSte7基因表达结果,推测D1和D2在AbSte7与AbFus3的锚定互作中起着重要的作用,D1和D2位点可能是AbFus3的锚定作用位点。