CXCR4启动子区低甲基化介导其上调诱导大鼠炎症性痛敏的机制研究

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背景慢性炎症痛是一种常见的临床疾病,严重影响病人的功能状态和生活质量。有研究报道DNA甲基化与慢性疼痛的发病机制有关。然而,在炎症性痛敏情况下,DNA甲基化是否参与调控特定基因表达进而介导炎症痛敏的分子机制仍然不清。目的本研究旨在探讨趋化因子受体CXCR4在CFA诱导的慢性炎症痛中的作用,并从表观遗传学的方面研究CXCR4基因启动子调控区CpG岛甲基化状态,在基因、分子和整体水平来探讨CXCL12/CXCR4信号通路在慢性炎症痛中的作用特点及其机制。方法1.用完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导大鼠炎症疼痛模型的建立2.用行为学检测来判断大鼠的机械性触诱发痛和热痛觉过敏的程度3.用免疫荧光双标染色来定位表达CXCR4的细胞类型4.用western blot方法检测DRGs中CXCR4蛋白含量变化情况5.用Real-time PCR法检测CXCLl2和CXCR4 mRNA的表达6.用甲基化特异性PCR(MSP)和重亚硫酸测序PCR(BSP)对CXCR4基因启动子区甲基化检测7.用染色质免疫沉淀分析法(ChIP)检测NF-κB p65与CXCR4基因启动子区CpG岛结合情况。结果研究结果显示足底注射完全弗氏佐剂(CFA)能诱导大鼠出现显著的痛觉过敏,同时也能显著增加背根神经节(DRG)中的CXCR4 mRNA和蛋白的表达,其配体CXCL12表达同样显著上调。鞘内注射CXCR4阻断剂AMD3100能显著缓解炎症大鼠的痛觉过敏,效果呈时间和剂量依赖性。进一步通过甲基化特异性PCR和重亚硫酸测序PCR分析发现,足底注射CFA后,CXCR4启动子调控区CpG岛发生明显的去甲基化,参与DNA甲基化酶DNMT3b也显著下调。通过生物信息学预测发现,CXCR4启动子调控区CpG岛上存在3个潜在的P65结合位点,并进一步通过染色质免疫沉淀证实确实存在,且炎症组的结合能力明显强于对照组。结论炎症痛时DRG中CXCR4基因启动区低甲基化同时增强p65结合进而促进CXCR4基因表达上调,高表达的CXCR4可能参与外周痛觉信号的调制,最终产生炎症性痛过敏;这些研究结果有望从表观遗传的角度为治疗慢性痛提供理论依据。
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