论文部分内容阅读
目的：本实验研究ATRA(all trans.retinoic acid，全反式维甲酸)及联合应用BDNF(brain-derived neurotrophic factor，脑源性神经营养因子)、GDNF(glial cellline-derived neurotrophic factor，胶质细胞源性神经营养因子)对体外培养的新生大鼠NSCs/NPs(neural stem cells/neural precursors，神经干细胞/前体细胞)分化的影响。
方法：
取新生SD大鼠(0-48 h)的前脑侧脑室周围脑组织(含SVZ，subventricular zone)或海马(含SGZ，subgranular zone)，按NSCs/NPs的常规培养方法分离、培养。用免疫细胞化学鉴定nestin(巢蛋白)、MAP-2(microtubule.associated protein 2，微管相关蛋白2)、GFAP(glial fibrillary acidic protein，胶质原纤维酸性蛋白)及MBP(myelinbasic protein，髓磷脂碱性蛋白)的表达，用免疫荧光双染观察nestin/GFAP、nestin/MAP-2的共表达，来观察ATRA、BDNF、GDNF单独或联合应用对次代神经球细胞分化的作用。
结果：
1.单独使用EGF(epidermic growth factor，表皮生长因子)、bFGF(basic fibroblastgrowth factor，碱性成纤维细胞生长因子)或联合使用EGF、bFGF对新生大鼠SVZ区及SGZ区原代分离细胞的增殖均有促进作用，EGF反应性神经球的直径大于bFGF反应性神经球的直径，EGF+bFGF的作用优于单独使用EGF，SVZ区细胞对EGF的反应性优于SGZ区。
2.SVZ区EGF反应性原代及次代神经球均显示nestin及GFAP阳性，免疫荧光双染结果显示有nestin/GFAP双阳性细胞。
3.次代神经球分化6～7天后，约9.024±0.71％的细胞呈MAP-2阳性，约29.86±8.41％的细胞呈GFAP阳性，另外，偶尔可见MBP阳性细胞，但大部分细胞仍呈nestin阳性(84.45±5.36％)。分化细胞中也可见nestin/GFAP共表达，但未见nestin/MAP-2共表达。
4.1 μM ATRA可促进次代NSCs/NPs的分化，其中MAP-2阳性细胞的比例达29.14±5.00％，明显高于对照组(7.19±1.21％)。.ATRA联合应用10 ng/ml的BDNF或GDNF，与单独使用ATRA比较，并不显著提高NSCs/NPs分化为MAP-2阳性细胞的比例。各组GFAP及nestin表达无差别。
结论：
1.新生大鼠SVZ区及SGZ区存在对EGF和/或bFGF起反应的细胞，EGF的作用强于bFGF。
2.新生大鼠SVZ区存在EGF反应性神经干细胞/前体细胞。在自然分化条件下，分化细胞主要是胶质细胞。
3.ATRA可以促进新生大鼠SVZ区的EGF反应性神经干细胞/前体细胞向MAP-2阳性神经元样细胞分化，ATRA联合应用10 ng/ml浓度的BDNF或GDNF无明显协同作用。