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口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）主要通过呼吸道、消化道进入动物机体,黏膜系统是机体抵抗病原入侵的第一道防线。分泌型IgA抗体（sIgA）是黏膜免疫产生特异性的标志,也是黏膜免疫的主要效应因子,对机体抵抗FMDV的入侵具有极其重要的作用。本研究构建A型FMDV结构蛋白VP1基因的重组表达载体,利用大肠杆菌表达纯化的蛋白作为包被抗原,建立一种检测黏膜分泌物中FMDV特异性sIgA抗体的间接ELISA方法,为监测FMDV特异性sIgA抗体水平变化规律及黏膜免疫效果评价提供基础方法,同时为口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease,FMD）的早期诊断提供一种新方法。具体研究内容如下:1、FMDV黏膜特异性sIgA抗体ELISA检测抗原的制备本研究构建了pET30a-VP1原核表达载体,将重组质粒在原核表达工程菌BL21（DE3）中进行表达,将表达的蛋白用亲和层析法进行纯化,用Western blot验证其反应原性良好。表达纯化的蛋白经SDS-PAGE电泳检测分子量为24.3ku,BCA TM法测定蛋白浓度为0.7mg/mL。2、FMDV黏膜特异性sIgA抗体ELISA方法的建立以纯化的FMDV结构蛋白VP1作为包被抗原,以鼠抗猪IgA单克隆抗体为二抗,辣根过氧化酶（HRP）标记的羊抗鼠IgG抗体为三抗,筛选ELISA各项最佳条件,建立A型FMDV特异性sIgA抗体间接ELISA检测方法。结果表明ELISA最佳工作条件为抗原包被浓度为3.5μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,鼠抗猪IgA单抗稀释度为1:5000,酶标记抗体稀释度为1:2500,样品、二抗、三抗的作用时间都为37℃反应30 min,底物室温显色10 min。该方法与猪瘟（classical swine fever,CSF）、猪繁殖与呼吸道综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）、猪圆环（porcine circovirus,PCV）和猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）的特异性IgA抗体没有交叉反应,都为阴性。敏感性在95%以上,特异性在87%以上。批内和批间重复性实验的变异系数介于3.16%9.76%,表明该方法具有良好的可重复性。3.FMDV黏膜特异性sIgA抗体ELISA方法的临床应用用建立的ELISA方法检测了A型FMDV攻毒-同居感染实验猪鼻拭子样品中特异性sIgA抗体变化趋势,同时与血清中IgG和3ABC抗体检测结果相比较。实验结果表明猪在感染FMD后的1天,鼻拭子中FMDV特异性sIgA抗体就能够检出,比血清中IgG和3ABC抗体出现的时间早,在监测的第60天仍有部分样品sIgA为阳性。尽管本研究中A型与O型交叉反应不能完全避免,但是通过调整合适的cut-off值,交叉反应能够大大降低,从而保证了该方法具有良好的敏感性和特异性。该方法为监测FMDV特异性sIgA抗体水平变化规律及黏膜免疫效果评价提供了基础方法,同时为FMD的早期诊断提供了一种新方法。