论文部分内容阅读
草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国淡水养殖产量最大的经济鱼类,在高温条件下极易患病。本研究旨在通过转录组分析,从免疫应答早、中、后期研究高温影响草鱼免疫应答的关键基因,然后探索玉屏风多糖(YPF-P)合生元和当归多糖(ASP)合生元对热应激草鱼免疫性能的影响,为中药多糖合生元在草鱼替抗类添加剂的应用奠定研究基础。研究内容和结果如下:1、热应激对草鱼免疫应答影响的转录组研究将草鱼(20±2 g)分为常温组(28℃)和高温组(34℃),在温度胁迫24 h后,注射嗜水气单胞菌LPS并在其后0、6、24和72 h采集草鱼脾脏进行转录组测序。本研究在高温组与常温组的四个时间点分别筛选出1497、126、383、4841个差异表达mRNA,28、28、20、141个差异表达miRNA和62、3、15、1133个miRNA-mRNA对。研究发现谷胱甘肽代谢、蛋白酶体、内质网蛋白加工和细胞因子-细胞因子受体的相互作用等通路的基因参与了草鱼热应激后的免疫应答,为科学解释高温条件下草鱼极易患病提供了理论基础,也为后续的防治研究提供了研究靶点。2、玉屏风多糖合生元对热应激草鱼的免疫调节将草鱼(20±2 g)分成四组进行21 d的饲养试验,对照组饲喂基础日粮,试验组分别添加0.08%、0.12%、0.20%的YPF-P,并加入1%复合益生菌(乳酸菌、嗜热链球菌、枯草芽孢杆菌)拌料。饲养试验结束后在草鱼热应激(32~34℃)四个时间点(0、6、24和48 h)采集样品并测定血清、肝脏生化指标和肝脏相关基因表达量。结果表明,各浓度组谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力在应激前后低于对照组,而0.12%YPF-P组在应激前后均显著降低(P<0.05)。0.12%和0.20%YPF-P组总超氧化物歧化酶(SOD)活力在应激前后高于对照组,而0.12%YPF-P组在0 h和24 h均显著提高(P<0.05)。各浓度组总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽还原酶(GR)活力在应激前后高于对照组,0.12%和0.2%YPF-P组GSH-PX活力在6 h显著提高(P<0.05),0.12%YPF-P组GR活力在0 h和48 h显著提高(P<0.05)。各浓度组丙二醛(MDA)含量在应激后低于对照组,而0.12%YPF-P组在24 h和48 h显著降低(P<0.05)。与对照组相比,0.12%和0.20%YPF-P组Nrf2和Cu/Zn-SOD表达量在0 h和6 h显著升高(P<0.05),Keap1表达量在0 h、24h和48 h显著降低(P<0.05);0.12%YPF-P组HSP70表达量在24 h和48 h显著升高(P<0.05),GSH-PX表达量在6 h和24 h显著升高(P<0.05),GR表达量在应激前后均显著升高(P<0.05);各浓度组MHC II表达量在应激前后均显著升高(P<0.05)。0.08%和0.12%YPF-P组IL-8表达量在24 h和48 h稍低于对照组(P>0.05)。以上结果表明,饲料中添加0.12%玉屏风多糖合生元能提高草鱼的抗氧化应激能力,具有较好的免疫调节作用。3、当归多糖合生元对热应激草鱼的免疫调节将草鱼(20±2 g)分成四组进行21 d的饲养试验,对照组饲喂基础日粮,试验组分别添加0.08%、0.12%、0.20%的ASP,并加入1%复合益生菌拌料。饲养试验结束后在草鱼热应激(32~34℃)四个时间点(0、6、24和48 h)采集样品并测定血清、肝脏生化指标和肝脏相关基因表达量。结果表明,与对照组相比,0.12%和0.20%ASP组ALT活力在0 h和6 h显著降低(P<0.05),AST活力在应激前后均显著降低(P<0.05),SOD活力在0、24和48 h显著提高(P<0.05);0.20%ASP组碱性磷酸酶(AKP)活力在0 h显著提高(P<0.05),MDA含量在48 h显著降低(P<0.05);各浓度组的溶菌酶(LZM)和T-AOC活力在应激前后稍高于对照组(P>0.05)。各浓度组CAT活力在应激前后高于对照组,而0.2%ASP组在6 h显著提高(P<0.05)。与对照组相比,0.20%ASP组Nrf2表达量在0-24 h显著升高(P<0.05),Keap1表达量在6 h和24 h在均显著降低(P<0.05);0.12%和0.20%ASP组Cu/Zn-SOD表达量在0 h和6 h显著升高(P<0.05),CAT表达量分别在6 h时和48 h显著升高(P<0.05),IL-8表达量在应激后均稍低于对照组(P>0.05);0.08%和0.20%ASP组HSP70和HSP90表达量在应激后均显著升高(P<0.05);各浓度组在应激前后MHC II表达量均显著升高(P<0.05)。以上结果表明,饲料中添加0.2%当归多糖合生元能提高草鱼的免疫和抗氧化应激能力。