桃是我国最古老的果树之一,属于蔷薇科(Rosaceae)桃亚属(Amygdalus Prunus persica ( L.) Batsch.)果树,生长遍及南北半球温带地区。其果实属于呼吸跃变型,在发育与成熟过程中果实经历着色泽、质地、风味等一系列的深刻变化,特别是在采后的后熟阶段,果实硬度下降很快,降低了果实的商品性能。在桃果实后熟阶段多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)起主要作用,它可以使果实的果胶物质降解、细胞壁结构破坏,导致果实快速软化。该酶的释放与表达是受基因严格调控的,而启动子是基因表达调控的重要顺式元件,对基因表达与否以及表达量的高低起着重要作用。延缓果实后熟、抑制PG酶的表达,进而创造新的种质,因此研究PG基因的调控元件——启动子就具有了重要意义。本研究的主要目的是克隆桃PG基因的启动子,对该启动子序列进行分析,并在此基础上构建缺失表达载体,为下一步研究其功能奠定基础。研究的主要内容为:比对已报道的桃PG基因序列,依据引物设计原则,设计三条特异引物;通过改良CTAB法提取DNA;采用Tail-PCR方法扩增并克隆到桃PG基因5′端侧翼序列,并对该序列进行分析;登陆NCBI进行BLASTn比对;序列提交GenBank数据库;扩增并克隆缺失片段,构建缺失表达载体。研究结果表明克隆到的986bp序列3′端与已报道的PG酶基因序列的5′端部分序列同源性为96%,剩余5′端906bp在GenBank中没有同源片段,表明该片段为PG酶基因5′端侧翼序列。递交数据库,登陆号为FJ940722。用Neural Network Promoter Prediction、PLACE等软件对序列进行基础启动子、转录起始位点、顺式作用元件和起始密码子等分析,发现在789bp-839bp位置存在基础启动子序列,转录起始位点是位于828 bp的碱基C,其可能性为0.98;序列中含有丰富的顺式作用元件,除了具有基本的CAAT-BOX和TATA-BOX外,还含有其他重要作用元件GATA-BOX、ARR1AT-BOX、POLLEN1LELAT52、ACGTATERD1等。在对该序列分析基础上,进一步设计引物,扩增得到含有该序列部分重要元件的三个缺失片段;对片段进行回收,替代植物表达载体pBI121中35S启动子,构建三个植物缺失表达载体。这对以后深入研究PG基因的调控等研究奠定了基础。