阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)是一种常见的神经退行性疾病，也是老年人发生痴呆的首要原因，其典型的病理改变是神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)和老年斑(senile plaques，SP)。临床上主要表现为缓慢、进行性的记忆和认知功能减退。AD是老年人伤残和死亡的首要原因之一。根据阿尔茨海默病协会统计，目前美国有四百万人患AD，在未来10年，此数字可能增加到1亿。国内对AD进行了大样本流行病学调查，结果显示全国约有AD患者600万人左右，占世界总病例的四分之一。患者病程从记忆减退到卧床阶段要经过很多年且需要不断的照料，给家庭和社会带来巨大的负担。AD的神经变性疾病是医学中最复杂且难以挑战的疾病之一。研究者指出，大量的资料提示AD为多样的生物机制。AD的病因和发病机制复杂，迄今仍没有一致的意见。但文献复习证据表明炎症反应是AD的重要发病机制之一。 研究证实环氧化酶2(cyclooxygenase-2 enzyme，COX-2)在炎症反应中起特殊作用，其在AD发病中具有重要作用。环氧化酶(COX)是前列腺素(PGs)合成的限速酶，至少有两种亚型：COX-1和COX-2。COX-2尽管在20世纪90年代早期才发现，但其在外周组织炎症反应中起重要作用。COX-2的脑内表达与前炎性活动有关，研究认为其有助于许多急性与慢性神经变性进程。COX-2在炎症中具有重要作用，其过表达可促进细胞增殖，COX-2基因调节区域的多态性可影响COX-2的功能或表达，进而有助于个体差异对阿尔茨海默病的易感性。然而COX-2在神经变性疾病中的作用仍存在争议，需要大量的临床资料及实验证实。本研究对COX-2基因的1195和765两个多态位点进行检测，以揭示其与阿尔茨海默病的可能相关性。 1、材料和方法 随机选取90例AD患者(男32人，女58人，广州市老人院)，年龄69～92岁，对照组为广州市某单位正常退休职工110例(男48人，女62人)，年龄65～86岁。所有AD患者经检查，均符合Alzheimer病DSM-Ⅳ标准与NINCDS-ADRDA诊断标准，对病例组患者都进行了简易智力状态检查(Mini-mental State Examination，MMSE)评分，并结合脑电、CT、MRI和单电子发射断层扫描(SPECT)排除其他类型的痴呆疾病。痴呆分型：MMSE<10为重度；MMSE得分在10～24范围内(其中包括10分和24分)为轻中度。 采用Qiagen DNA提取试剂盒提取外周血白细胞DNA，根据位点基因序列设计引物，采用PCR-限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)分别对90例AD患者和110例正常对照进行基因分型，PCR扩增出各样本的目的片断，对扩增产物进行酶切，酶切产物经2％琼脂糖凝胶电泳，EB染色，凝胶成像系统判定结果。 2、结果 2.1 AD患者和对照组COX-2基因1195位点基因型及基因频率分布检测结果 在所有研究对象中，共检出3种COX-2-1195基因型，90例AD患者中，GG基因型频率为21.0％，GA基因型频率为50.0％，AA基因型频率为29.0％，G、A等位基因频率分别为46.1％和53.9％；110例对照组中GG基因型频率为23.6％，GA基因型频率为51.0％，AA基因型频率为25.4％，G、A等位基因频率分别为49.1％和50.9％；与对照组比较，AD组的AA基因型频率、A等位基因频率差异均无统计学意义。进一步按重度、轻中度进行分组，重度AD患者中，GG基因型频率为21.2％，GA基因型频率为51.9％，AA基因型频率为26.9％，G、A等位基因频率分别为47.1％和52.9％;A等位基因频率与轻中度AD及对照组相比差异均无统计学意义。提示COX-2-1195G/A位点与AD可能无关，A等位基因与AD的发生可能无关。 2.2 AD患者和对照组COX-2基因765位点基因型及基因频率分布检测结果 90例AD患者中，GG基因型频率为77.8％，GC基因型频率为20.0％，CC基因型频率为2.2％，G、C等位基因频率分别为87.8％和12.2％；对照组中GG基因型频率为60.0％，GC基因型频率为35.5％，CC基因型频率为4.5％，G、C等位基因频率分别为77.7％和22.3％；与对照组表比较，AD组中CC基因型频率、C等位基因频率差异均有统计学意义。进一步按轻中度、重度进行分组，重度AD中，GG基因型频率为76.9％，GC基因型频率为21.20％，CC基因型频率为1.9％，G、C等位基因频率分别为87.5％和12.5％；C等位基因频率重度AD与轻中度AD相比差异无统计学意义。但二者与对照组相比差异有统计学意义。提示COX-2-765G/C位点与AD可能有关，C等位基因可能为AD的保护因素。 2.3 AD患者血浆中COX-2蛋白水平90例AD患者中，COX-2蛋白水平为(124.95±8.73)IUL；110例正常对照组中，COX-2蛋白水平为(51.81±7.33)IU/L；两者差异有统计学意义(P<0.05)，AD患者血浆中COX-2蛋白水平显著高于正常对照组，提示COX-2蛋白水平升高可能是AD的一个危险因素。 3、结论 1.COX一2基因启动子区-1195G/A多态性可能与中国南方人群AD的发生无关。 2.COX-2基因启动子区-765G/C多态性与AD的发生可能有关；G等位基因频率在AD组中显著高于正常对照组，-765G/C多态性可能是AD发生的危险因素。 3.AD患者血浆中COX-2蛋白水平显著高于正常对照组，且这种升高可能是由于COX-2基因-765G/C多态性引起，进一步验证了-765G/C多态性与AD的发生可能有关。 4.COX-2-765G/C多态性可能导致COX-2蛋白水平升高。