NANOG在急性髓系白血病及急性淋巴细胞白血病细胞中的作用研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lolotang530
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探讨NANOG基因在人急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中的表达及该基因对细胞干性或生物学行为的影响和可能机制。方法:(1)利用RT-PCR及Western blot技术检测多种急性白血病细胞系及患者骨髓细胞中NANOG的表达情况。通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒,感染急性白血病细胞后经分选获得稳定表达株,并在基因及蛋白水平检测了NANOG干扰效率。(2)用CCK-8法、流式细胞仪、甲基纤维素集落培养等检测干扰NANOG前后对U937、THP-1细胞增殖、凋亡、克隆形成能力的影响。利用裸鼠皮下移植模型检测干扰NANOG前后对U937细胞成瘤能力的影响。利用实时定量PCR及Western blot技术检测下调NANOG基因对BMI1表达的影响,构建稳定下调BMI1表达或同时过表达NANOGP8的U937细胞,通过检测细胞的增殖、凋亡、克隆形成能力的变化验证两者的相互关系。利用双荧光素酶报告基因系统证实NANOGP8激活BMI1表达的分子机制。(3)用CCK-8法、流式细胞仪等检测干扰NANOG前后对MOLT-4细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。利用基因芯片技术比较NANOG干扰前后MOLT-4细胞的基因表达变化,寻找可能的作用通路,并经实时定量PCR技术证实。结果:(1)多种急性白血病细胞表达NANOGP8基因和蛋白。构建的干扰NANOGP8的慢病毒颗粒感染白血病细胞后可有效下调NANOGP8基因及蛋白的表达。(2)在U937、THP-1细胞中下调NANOGP8的表达可明显抑制细胞的增殖,且呈时间依赖性。感染shNANOG-1或shNANOG-2慢病毒的U937.THP-1细胞其凋亡细胞比例较sh-control组明显升高(P<0.05),而细胞集落形成数较sh-control组明显减少(P<0.05)。裸鼠皮下移植模型显示接种shNANOG-1感染的U937细胞其瘤体重量和体积均较sh-control组明显减少(P<0.05)。进一步检测发现抑制U937细胞中NANOGP8的表达可同时下调BMI1的表达,但下调BMI1的表达不影响NANOGP8的表达。下调BMI1或NANOGP8的表达均可抑制U937细胞的增殖、克隆形成能力并促进细胞凋亡,在下调BMI1的同时高表达NANOGP8不能纠正以上影响。通过双荧光素酶报告基因系统证实NANOGP8可通过结合BMI1基因启动子-220~-210区域激活基因的转录。(3)在MOLT-4细胞中下调NANOGP8的表达可明显抑制细胞的增殖,且呈时间依赖性。感染shNANOG-1或shNANOG-2慢病毒的MOLT-4细胞其凋亡细胞比例较sh-control组明显升高(P<0.05),且G0/G1期细胞比例较sh-control组明显增高(P<0.05)。基因芯片技术显示下调MOLT-4细胞中NANOGP8的表达可引起多条通路基因的表达变化,其中富集积分较高的共有通路为P53信号通路,实时定量PCR法证实shNANOG-1组细胞中TP53、CDKN1A、CDKN2A及CYCS基因表达较sh-control组显著升高(P<0.05),而MDM2及CCND1基因表达则明显下降(P<0.05)。结论:(1)在AML、T-ALL细胞系及患者白血病细胞中均存在NANOGP8的表达。(2)下调AML细胞中的NANOGP8的表达可使细胞增殖减缓、凋亡增加、克隆形成能力及成瘤能力减弱。NANOGP8可通过结合BMI1基因启动子区域激活基因的转录,并参与了对AML细胞干性的调控。(3)下调T-ALL细胞中的NANOGP8的表达可使细胞增殖减缓、凋亡增加、细胞阻滞于G0/G1期。NANOGP8可通过P53依赖的信号通路参与T-ALL细胞生物学行为的调控。
其他文献
<正> 胃粘膜血流量(GMBF)在消化性溃疡的发生、发展和愈合过程中起着重要作用,胃粘膜电位(GMPD)为检测胃粘膜结构完整性的指标。我们于1988年1~6月对40例各期老年胃溃疡患者的
目的 探讨中医小针刀微创结合西医治疗支气管哮喘的临床疗效。方法 将我院收治的支气管哮喘患者60例,按随机方法分为治疗组(32例)和对照组(28例),治疗组采用中医小针刀微创治疗为
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
会议
通过水力计算软件SPS对长沙联通工程进行正反输两种工况的水力计算,根据计算结果得到了该工程的设计基础参数,很好地实现了理论计算与工程实际的结合。
兴蔬辣椒该品种是由湖南省蔬菜研究所(湖南省长沙市芙蓉区马坡岭,邮编:410125)培育而成。
针对页岩有机孔隙的形成与演化,开展了从未熟—低熟—成熟—高成熟—过成熟全系列的地质条件约束下的成岩成烃演化热模拟实验,利用氩离子抛光-场发射扫描电镜对原始样品和模
Highlights    作为飞利浦电视机的独门秘籍.流光溢彩已经伴随飞利浦电视机高端产品走过了接近七年的岁月。经过数年的发展,流光溢彩也在不断升级,PFL9605D搭载的就是最新的流光溢彩,技术,最新技术人性化地加入了墙色适应功能,因为飞利浦设计师们也开始发现现代家庭的电视背景墙并不再是以往的白色,而变为了各种色彩,因此用户只需要在电视机设置中,根据自己的电视背景墙颜色设置好,机身两侧的光线颜
本论文从实际工作出发,提出了辽宁医学院生药学开放型实验教学的基本模式分为时间的开放、场所的开放、实验内容的开放。文中还从为学生自主学习构建多媒体教学平台进行探讨,并
"84"消毒液是广泛用于医院消毒的含氯消毒剂.为观察其在不同浓度下对细菌繁殖体的杀灭效果,进行了定量悬液杀菌试验.