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沙门氏菌(Salmonella)是一种重要的人兽共患病原菌，在自然界中具有广泛的宿主，包括人类、禽类、犬、猪、鼠等。沙门氏菌感染者的主要临床症状为呕吐、腹泻、发热等，致病的主要因素为鞭毛、菌毛及毒力岛(Salmonella pathogenicity Island，SPI)上成簇分布的毒力基因等。目前在沙门氏菌基因组上发现了大约39个SPI，这些毒力岛相互作用，是沙门氏菌致病力的重要组成部分，其中SPI-1和SPI-2是沙门氏菌感染、侵袭及定殖于宿主体内所必须的。SPI-1主要介导沙门氏菌对宿主细胞的侵染，SPI-2是沙门氏菌在宿主细胞内定殖和免疫逃避的关键，两者分别编码一个三型分泌系统(TypeⅢsecretion systems，T3SS)，T3SS将细菌产生的毒力蛋白分泌到宿主体内。大量体外试验表明，位于SPI-1上的调控因子HilD不仅调控SPI-1上基因表达，而且是SPI-1和SPI-2相互作用的转录调控中心，位于SPI-2上的SsrAB是主要调节SPI-2基因表达的二元调控系统。然而，体内环境下HilD对SPI-2调控作用研究尚未见报道，HilD如何通过介导ssrAB基因表达，最终实现调控SPI-2基因也尚未确定。 本研究以鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium，S.T）为研究对象，秀丽隐杆线虫为模式生物，采用同源重组方法在S.T的亲本株、hilD基因缺失株及hilD基因回复株的ssrAB基因中融合gfp基因;为保证试验的严谨性，将构建的GFP标记菌株及S.T菌株内电转入pcDNA-3.1(+)质粒，将构建有pcDNA-3.1(+)质粒的GFP分子标记菌株饲喂秀丽隐杆线虫，利用荧光显微镜比较体内、体外环境下不同菌株GFP发光强弱;通过构建pET30a-hilD原核表达载体，并将其转入BL21菌株内，表达及纯化目的蛋白HilD，同时结合凝胶迁移实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA)分析HilD与ssrAB相互作用的结合区域。 结果显示，成功构建了gfp融合菌株，分别命名为S.T（ssrAB-gfp）、S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp)、S.T（ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD）。体内、外环境下，gfp融合菌株均可发出绿光，菌株间发光强度由强到弱依次为:S.T(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、S.T（ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD）、S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1)，对照组S.T(pcDNA3.1)不发光，其中体外环境下，hilD基因缺失株与hilD基因回复株发光强度差异较小;体内环境下，hilD基因回复株的发光强度明显高于hilD基因缺失株。成功表达和纯化目的蛋白HilD，HilD与ssrAB间存在特异性结合，且结合区域定位到+412至+430。 结果表明，成功构建了含有gfp基因及pcDNA-3.1(+)质粒的鼠伤寒沙门氏菌亲本株、hilD基因缺失株及hilD基因回复株;在体内、体外环境下，HilD对ssrAB基因均具有正调控作用，其中体内正调控现象较为明显;HilD与ssrAB在ssrA的+412至+430区域内存在相互作用。