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目的:本课题在姜丽娟教授临床“和畅”思想的指导下探索国家级名中医张良英教授经验方温阳健脾方(白术15g、川续断15g、桑寄生15g、菟丝子20g、淫羊藿15g、黄芪20g、甘草6g、党参20g、茯苓15g、杜仲15g、阿胶15g),通过检测流产模型小鼠蜕膜组织中Foxp3、RORgγt的表达水平的变化,探索温阳健脾方治疗不明原因复发性流产的作用机理。方法:1.实验方法:构建CBA/J雌鼠×DBA/2孕鼠作为不明原因复发性流产疾病动物模型,正常妊娠组选择CBA/J雌鼠×BALB/c孕鼠,将10只小鼠编为一组,正常妊娠组为空白对照组,URSA小鼠模型组分为温阳健脾方组、地屈孕酮组、模型对照组,其中温阳健脾方组依据给药剂量随机分为三个剂量组,即(低、中、高剂量)。通过分别给予不同干预后,各组小鼠于孕第14天取其蜕膜组织,进行以下实验:(1)运用流式细胞术(FACs)检测其中Th17细胞特异转录因子维A酸孤独受体γt(RORgγt)及Treg细胞特异转录因子叉头样转录因子p3(Foxp3)的表达水平;(2)统计各组小鼠胚胎丢失率;(3)采用多个样本的方差分析方法,用SPSS22.0软件对空白对照组、地屈孕酮组、温阳健脾方组(低、中、高剂量)及模型对照组小鼠妊娠子宫蜕膜组织中叉头样转录因子p3(Foxp3)、维A酸孤独受体γt(RORgγt)的表达水平差异,统计各组胚胎丢失率并进行数据分析。2.阅读古代经典文献,学习滑胎的相关病因病机及治疗经方;查阅近现代中医各流派大家对于不明原因复发性流产的研究及发展;通过阅读不明原因复发性流产相关的中文文献及外文文献,进一步了解不明原因复发性流产的发病机制、诊断及治疗手段,了解疾病的新进展、新方向。结果:1.空白对照组的胚胎丢失率明显低于模型对照组,P<0.01,有显著统计学意义;温阳健脾方低剂量组、温阳健脾方中剂量组、温阳健脾方高剂量组、地屈孕酮组的胚胎丢失率明显低于模型对照组,P<0.05,有统计学意义;地屈孕酮组、温阳健脾方低剂量组、温阳健脾方中剂量组、温阳健脾方高剂量组各组两两相比,胚胎丢失率无统计学差异。2.模型对照组与空白对照组相比,RORgγt水平明显升高,(P<0.01),Foxp3水平明显降低(P<0.01);地屈孕酮组、温阳健脾方低剂量组、温阳健脾方中剂量组、温阳健脾方高剂量组各组两两相比,RORgγt与Foxp3水平无统计学差异;与模型对照组相比,地屈孕酮组、温阳健脾方低剂量组、温阳健脾方中剂量组、温阳健脾方高剂量组中RORgγt水平下降,Foxp3水平上升,其中中剂量组(P<0.05)、地屈孕酮组(P<0.05)具有统计学差异。结论:1.应用CBA/J×DBA/2小鼠构建流产小鼠模型,经实验证明不同分组的该模型小鼠均存在妊娠子宫蜕膜组织中Foxp3水平下降,而RORgγt水平上升情况。2.不同剂量的温阳健脾方可不同程度上调URSA模型小鼠妊娠子宫蜕膜组织中Foxp3水平,同时可不同程度下调RORgγt水平,与模型对照组相比,中剂量组及地屈孕酮组较为显著,而低、中、高剂量组别之间未见明显差异。3.作为Treg细胞的特异性转录分子之一,当Treg细胞处于优势地位时,Foxp3及相关细胞因子在蜕膜组织中高表达;而作为CD4+T细胞Th17细胞的特异性转录分子之一,当Th17细胞处于优势地位时,RORgγt及相关细胞因子在蜕膜组织中高表达。通过检测各组实验小鼠妊娠子宫蜕膜组织Foxp3、RORgγt表达水平及各组别小鼠胚胎吸收率可推论上调Foxp3表达水平、下调RORgγt表达水平可能是温阳健脾方发挥保胎效用的作用机制。在模型对照组(即URSA小鼠模型)中RORgγt高表达,经温阳健脾方和地屈孕酮干预后,这种优势性的表达发生了一定程度上的逆转,表现出了Foxp3的优势性表达,由此可见温阳健脾方可使Foxp3的优势性表达替代RORgγt的优势性表达,这使得流产模型中的Th17/Treg比例重新向正常的比例回归。