肿瘤的形成是细胞信号调节通路及其构成网络调节紊乱的结果。各种致瘤因素异常激活细胞内信号转导通路,并引起调节失控,进而引发细胞周期重要检测点紊乱,从而造成肿瘤细胞恶性生长优势。D型细胞周期蛋白——cyclinD1,在多种肿瘤中表现为过度表达,且过表达的cyclinD1是肿瘤细胞G1期行进必不可少的正性调节蛋白之一,其基因转录、表达受多种因素的调控。真核生物基因的表达调控主要是转录水平的调控,其受顺式作用元件与反式作用因子及其相互作用调节,两者结合才能共同实现对转录的调控。真核生物基因顺式作用元件分为启动子、增强子、沉默子,是调节基因转录的特定DNA序列。参与调节靶基因转录的的反式作用因子,即转录因子(transcriptional factor, TF)是能直接或间接识别或结合在各顺式作用元件相应的转录因子结合位点序列上,参与抑制或促进转录起始及调控转录效率,影响下游基因活性的一类蛋白质。其中转录因子EGFR和STAT3就是cyclinD1基因转录的诱导剂。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFRs, ErbB1)属Ⅰ型酪氨酸激酶细胞膜受体,为跨膜酪氨酸激酶生长因子受体。EGFR在多种肿瘤中发现过表达并发生核移位,EGFR在其配体刺激下全部移位入核并上调下游基因的活性,核移位的EGFR可结合到cyclinD1启动子区并且上调cyclinD1的转录活性。信号转导子及转录因子活化子STAT3(signal transducer and activation oftranscription 3,STAT3)是多种细胞因子和生长因子发挥作用的关键信号分子,不仅将细胞外的信号传递至胞核,而且直接参与基因调控；磷酸化活化的STAT3可从胞浆移位入核激活多种相关下游靶基因的表达。多项研究表明活化的STAT3与cyclinD1基因表达呈正相关性。EB病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)是一种与多种肿瘤发生发展密切相关的外部致病因子,它与鼻咽癌、Burkitt’s淋巴瘤、肺癌和胃癌等多种肿瘤的发生有关,其编码的潜伏膜蛋白质(latent membrane protein 1, LMP1)是重要的具有瘤基因功能的蛋白,有研究发现LMP1可以活化cyclinD1的表达,LMP1可以调控EGFR核移位,LMP1可以促进STAT3的磷酸化活化。在复杂的肿瘤发生发展调节网络中,是否cyclinD1就是LMP1调控转录因子EGFR和STAT3作用的重要靶基因呢?我们通过脂质体瞬时转染的方法,采用报告基因技术检测LMP1阳性及LMP1阴性细胞cyclinD1启动子活性改变,结果发现LMP1阳性细胞的cyclinD1启动子报告基因活性明显高于LMP1阴性细胞,然后用DZ1特异性抑制LMP1的表达后发现cyclinD1启动子活性显著下降,这从反面证明了LMP1对cyclinD1的调控诱导作用。接下来用EGFR、STAT3表达质粒转染及cyclinD1报道基因共转染LMP1阳性细胞及LMP1阴性细胞后发现EGFR、STAT3表达质粒可以诱导LMP1阳性细胞的cyclinD1启动子活性；而共转染EGFR、STAT3的显性负性突变体及cyclinD1报道基因至LMP1阳性及阴性细胞时则显著性抑制了LMP1阳性细胞中EGFR和STAT3各自上调的cyclin D1启动子活性,LMP1阴性细胞中上述变化不明显,证实了LMP1可调控转录因子EGFR、STAT3反式激活cyclinD1的活性。进一步我们应用siRNA技术特异性沉默LMP1阳性细胞的转录因子EGFR、STAT3的转录及表达,然后采用报告基因方法检测其cyclinD1启动子活性,结果发现EGFR siRNA、STAT3 siRNA分别及联合沉默EGFR、STAT3后cyclinD1启动子活性比对照组(转染非特异性siRNA组)显著下降,再次证实了EGFR、STAT3对cyclinD1的正性调控作用。同样采用siRNA技术特异性沉默LMP1阳性细胞转录因子EGFR、STAT3后用RT-PCR方法检测cyclinD1 mRNA水平,结果提示EGFR、STAT3分别及联合被沉默后cyclinD1 mRNA水平较对照组均显著下降,进一步用Western-Blot方法检测沉默EGFR、STAT3后cyclinD1蛋白表达,发现cyclinD1蛋白水平降低。以上结果证明了LMP1可调控转录因子EGFR、STAT3调节cyclinD1基因的mRNA转录和蛋白表达。综上所述,我们认为cyclinD1是LMP1调控转录因子EGFR和STAT3作用的重要靶基因。