性激素属于同化激素，由于它具有较强的蛋白质同化作用，在上世纪曾被广泛的应用于动物养殖过程中。然而，部分性激素化学性质稳定，不易分解，容易在动物组织中形成蓄积和残留，人类如果长期食用含有这些性激素的动物组织，容易导致机体代谢紊乱、发育异常甚至诱发癌变。因此，欧盟自上世纪80年代开始就通过立法来限制或者禁止在动物养殖业中使用性激素。我国农业部也颁布了一系列的公告，对相关性激素作了明确规定和要求。但由于利益的驱使，目前水产养殖中仍然存在滥用和非法添加违禁性激素类药物的现象。所以，不断加强对水产品中性激素类药物的检测和评价对保障水产食品的安全仍然具有重要意义。样品前处理技术是性激素残留分析的关键。简单、快速、高效是未来样品前处理技术的发展趋势。而我国目前仍主要采用传统的溶剂萃取，液液分配，柱层析净化，前处理方法自动化程度低、提取净化的效率不高，速度慢，且环境污染严重。因此，开发选择性好、灵敏度高、快速高效、绿色环保的样品前处理技术是食品安全检测的重要内容。本文利用亚临界R134a萃取技术作为新型、高效的样品前处理技术，分别通过与液相色谱（HPLC）和气相色谱质谱（GC-MS）的离线联用对水产品中的几种性激素残留进行了检测分析，并对萃取工艺、纯化方法和检测条件进行了优化，主要结果如下：1、建立了亚临界R134a萃取-HPLC离线联用技术检测水产品中甲基睾酮、丙酸睾酮、醋酸甲羟孕酮残留的分析方法。首先，利用亚临界R134a萃取目标物，然后，目标萃取物经过冷冻过滤去脂和C18固相萃取柱净化后，进行HPLC分析。通过单因素实验对萃取条件进行了优化，获得了最佳的萃取工艺条件：萃取温度25℃，萃取压力4MPa，夹带剂甲醇用量6mL。在最优的萃取、纯化及检测条件下，通过空白样品加标回收试验来验证方法的准确度和检出限。结果表明，在20~100μg/kg的添加水平下，各目标物的平均回收率在75.4%~94.2%之间；RSD为5.1%~11.2%。方法的检出限为8.4~12.5μg/kg。2、建立了亚临界R134a萃取-GC-MS离线联用技术检测水产品中6种性激素残留的分析方法。首先，利用亚临界R134a萃取目标物，然后，目标萃取物经过冷冻过滤去脂，C18和NH2固相萃取柱联用净化后，用七氟丁酸酐衍生后进行GC-MS分析。在单因素实验的基础上，以己烯雌酚的为代表，通过响应曲面法对萃取工艺进行了优化，获得了最佳的萃取工艺条件：萃取压力4MPa、萃取温度26℃、夹带剂用量4.7mL。在最优的萃取、纯化及检测条件下，通过空白样品加标回收试验来确定方法的准确度和检出限。结果表明，在1~10μg/kg的添加水平下，6种性激素的平均回收率在70.5%~103.6%之间，RSD为2.1%~12.1%，方法的检出限为0.2~1μg/kg。3、在市售实际样品中未检出本论文所考察的几种性激素，本论文选择用添加目标物的饲料来投喂锦鲤，从而制得含目标物的阳性样品，并用来检验上述研究建立起来的分析方法的适用性。该方法从阳性样品中成功检测出己烯雌酚残留，平均残留量为13.8μg/kg。本论文建立了一种水产品中性激素多残留分析的样品前处理的新方法。该方法简单、快速、高效、选择性好且灵敏度高，在多组分痕量物质的残留分析检测中有比较广泛的应用前景。