【摘 要】
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目的 研究一种新的人体蛋白结构域（Circadian locomoter output cycles kaput protein’s DNA-binding peptide,hCLOCK’s DNABIND,hClock-（35-47））对多种细胞细胞膜的穿膜作用及
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目的 研究一种新的人体蛋白结构域（Circadian locomoter output cycles kaput protein’s DNA-binding peptide,hCLOCK’s DNABIND,hClock-（35-47））对多种细胞细胞膜的穿膜作用及其通过大鼠血脑屏障的作用。在此基础上,进一步探讨了hClock-（35-47）通过细胞膜的一些相关机理,及其内化入细胞后对细胞近日节律基因转录的影响。 方法 化学合成hClock-（35-47）,N端标记FITC绿色荧光素,与培养的血管内皮细胞（ECV-304）和原代培养的神经胶质细胞孵化一定时间后,荧光显微镜下观察其对多种细胞细胞膜的穿膜作用,并采用Image-Pro Plus(Version 4.5 for WindowsTM)来分析细胞荧光强度。采用MTT比色实验测定hClock-（35-47）的细胞毒性。在此基础上,经大鼠颈总动脉注射hClock-（35-47）后,做大鼠大脑冰冻切片,荧光显微镜下观察其通过大鼠血脑屏障进入脑细胞的情况。在培养基中加入肝素,通过在荧光显微镜下观察标记FITC的hClock-（35-47）内化入细胞的情况,来了解肝素对hClock-（35-47）内化入细胞的抑制
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