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本试验从秦岭太白山区不同类型的土壤中采集土样20个,并从中分离到了251株放线菌,经室内平板对峙拮抗作用测定,得到对烟草赤星病菌有不同程度拮抗作用的放线菌51株,其中抑菌圈直径超过13mm的有12株。测定这12株的抗菌谱,通过皿内平板初筛、液体发酵复筛和单孢分离,得到了一株对多种植物病原真菌拮抗性较好且遗传稳定的新菌株LJ198-7。
本文对拮抗菌LJ198-7产生抗菌物质的发酵培养基、发酵温度、初始pH及通气量等因子进行了初筛,并对其摇瓶发酵条件进行了初步研究。研究表明LJ198-7菌株的适宜发酵培养基是:黄豆饼粉2%,葡萄糖1%,淀粉1.5%,碳酸钙0.25%,磷酸氢二钾0.05%。其适宜的摇瓶发酵条件是:初始pH值8.0、发酵温度30-34℃、摇床转速150r/min、发酵时间72h。培养基成分的正交试验结果表明,氮源是影响发酵液对赤星病菌抑菌活性的主要因素,发酵条件中培养时间是影响发酵液对赤星病菌抑菌活性的主要因素,其次是初始pH值,培养温度和摇床转速。
对LJ198-7活性产物粗提物的抑菌谱测定,发现该菌株有对十几种病原菌有较强的抑制作用,尤其对水稻稻瘟、玉米大斑、小麦根腐、黄瓜枯萎、番茄灰霉等病原真菌及十字花科软腐等细菌抑制率较高,1mg/1药剂浓度的抑制率都在45%以上,为该抗生素的应用领域提供了依据。
通过对LJ198-7的活性产物进行分离纯化,得到一个新的单组分化合物,其理化特性及结构初步分析结果为:此化合物紫外最大吸收波长为316nm;易溶于水、乙醇、甲醇等低级醇,几乎不溶于丙酮、乙醚、乙酸乙脂、乙酸丁脂、苯、三氯甲烷;熔点241-244℃;分子量为314;比旋光度:∣α∣D =-32°,用正丁醇:冰乙酸:水=4:1:1的条件下进行硅胶薄层层析,其Rf=0.40;与双缩脲试剂、品红和三氯化铁试剂反应为阴性,邻苯二甲酸-苯胺、茚三酮反应呈阳性,推知此新化合物为氨基糖苷类化合物,结合波谱分析结果将该化合物命名为1-(3-呋喃基-4-酰基)-2-N-氨基脒基葡萄苷,这是在氨基糖苷类化合物中发现的一种新抑菌活性物质,从而为新的氨基糖苷类农用抗生素的研发打下了良好基础。
对LJ198-7的活性产物拮抗机理的初步研究表明:LJ198-7活性产物能强烈抑制病原菌菌丝的生长和孢子的萌发,引起病原菌菌丝扭曲或膨大、分枝增多、分枝顶端细胞壁破裂、原生质外溢,产生溶菌作用:分生孢子数减少,孢子萌发率降低、芽管畸形;
温室条件下,LJ198-7活性产物不仅能烟草赤星病菌菌丝入侵,对烟草赤星有预防作用,而且对已侵入的菌丝也有很好的治疗效果。