论文部分内容阅读
前言 胃癌的发生发展涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活。1996年Ohta等用差异显示分析探针和外显子捕获法确定了一个新的基因，由于该基因氨基酸测序结果与组氨酸三联体（histidine triad，HIT）蛋白具有高度同源性，而基因内又包含有FRA3B脆性位点，因此命名为脆性组氨酸三联体基因（Fragile Histidine Triad，FHIT）。许多学者对多种肿瘤的FHIT基因进行了不同层面的研究，发现在绝大多数肿瘤中存在FHIT基因的异常，认为FHIT基因是一重要的候选抑癌基因。以往研究证明，nm23-H1基因与肿瘤的侵袭及转移抑制有关。 本研究用免疫组化方法对Fhit及nm23-H1蛋白在胃癌组织中的表达进行了检测，并分析了基因表达与胃癌临床病理因素之间的关系，为探讨FHIT及nm23-H1基因在胃癌发生发展过程中的作用。 实验材料 收集中国医科大学附属第一医院肿瘤科和辽宁省肿瘤医院1991年1月至1992年2月胃癌标本98例。其中，男69例，女29例；平均年龄54岁；早期胃癌6例，中期胃癌16例，晚期胃癌76例。组织学类型（按WHO胃癌组织学分型标准）包括乳头状腺癌12例；管状腺癌60例，其中高分化3例，中分化12例，低分化45例；未分化癌4例；印戒细胞癌17例；粘液腺癌5例。在98例胃癌标本中，有相应癌旁粘膜者94例，其中39例可观察到癌旁粘膜肠上皮化生，4例可观察到癌旁胃粘膜不典型增生。 方法 1．免疫组化方法 本实验免疫组化染色采用美国GBI技术有限公司近年推出的免疫组化检测二步法。Immuno-Bridge+试剂盒，兔抗人Fhit多克隆抗体（工作浓度卜50）和鼠抗人nm23单克隆抗体（工作浓度1: 1 00）均购自北京中山生物技术有限公司，用PBS代替一抗作阴性对照。 免疫组化染色结果判定以中LI一!公司赠送阳性切片为阳性对照，以PBS代林一抗作阴性对照。结果判定:FHIT和nm23一H，蛋白免疫染色阳性信号定位一」几细胞浆，呈栋黄色颗粒。每个标本随机观察5个高倍视野，每个视野计数200个细胞，取平均值。阳性细胞数<5%为阴性（一），5%一25%为弱阳性（+），25%一50%为中度阳J四三（++），>50%为强阳性（+++）。 2.统计学分析 统计计数资料采用xZ检验。P<0.05视为有显著统计学差异。结果 1.Fhit蛋白在不同胃粘膜病变的表达 “正常胃粘膜”的胃体腺、胃窦腺及癌旁粘膜组织的肠上皮化生Fhit蛋白阳性表达率分别为100%、85.7%和100%，而表层胃粘膜不典型增生及胃癌中Fhit蛋白表达率分别为50%和382%，且有显著统计学差异（P<0 .05）。 2.Fhit蛋白在胃癌组织中的表达 Fhit蛋白表达与胃癌的组织分型密切相关（P<0.05），其中乳头状腺癌的表达率最高（75%），低分化腺癌表达率最低（22.2%）。Fhit蛋白表达与胃癌Lauren分型相关（P<0.01），Fhit蛋白在弥漫型胃癌中表达率为 （29.6%）显著低于肠型胃癌的表达率（63%）。淋巴结转移阳性组Fhit蛋白表达率（30.1%）显著低于未转移者（64%）（P<0.05）。晚期胃癌Fhit蛋白的表达率（35.5%）低于中期胃癌（43.8%）和早期胃癌（“.3%），无明显统计学差异（P>0.05）。在淋巴结转移灶Fhit蛋邮日性表达者其原发灶Fhit蛋白表达阳性率（69.2%）显著高于淋巴结转移灶Fhit蛋白阴性表达者 （13.5%）（P<0.05）。在弥漫型和肠型胃癌的癌旁肠土皮化生组织Fllit蛋白表达均为100%，无统计学差异（P>0.05）。 3.胃癌组织中nm23一H，蛋白的表达 87例胃癌标本中nm23一Hl蛋邮日性表达率为33%（29257）。nm23一Hl蛋白在弥漫型胃癌中的阳性表达率为34%（23/67），在肠型中的阳性表达率为30%（6/20），其表达与胃癌肠眠n分型无明显统计学意义（P>0 .05）。n劝己3一H:蛋白表达随肿瘤的临床病理分期的演进而降低，有极显著的差异（P<0.05）。在29例n.口3一H，蛋白阳性表达的胃癌病例中，只有12例出现淋巴结转移，转移率41%，而在58例n.己3一H:阴性表达的病例中淋巴结转移率高达91%，n功己3一H:蛋白阳性表达者淋巴结转移率明显低于阴性表达者（P<0.05）。 4.胃癌组织中P比t蛋白和n切123一H:蛋白表达的关系 在26例n劝己3一H:蛋白表达阳性的胃癌中，而t蛋白表达阳性者16例（61.5%）;在52例n加己3一H，蛋白表达阴性的胃癌中，而t蛋白表达阴性者37例（71 .2%），两种蛋白表达之间有相关性（P<0.01）。结论 1.胃癌组织中Fhit蛋白的缺失是频发事件，FHIT可能是胃癌发生中重要的候选抑癌基因。 2.Fhit及n川123一H:蛋白在胃癌中的表达与胃癌淋巴结转移密切相关，且可能共同起作用，可作为临床预测转移及估计预后的重要参考指标。