目的检测Yes结合蛋白(Yes-Associated Protein, YAP)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC)患者中癌组织及对应癌旁组织中的表达情况；YAP表达量下降后对喉癌HEp-2细胞系细胞周期、迁移能力及对铂类药物的敏感性的影响。分析不同患者YAP表达水平与患者不同的性别、年龄、TNM分级、临床分期、病理分级、淋巴结转移、复发和肿瘤大小等临床特征的差异。探讨YAP在喉癌中表达差异及导致肿瘤发生的分子学机制,为喉癌的早期诊断、喉癌发生发展、浸润与转移机理的探索提供相应线索及科学依据。方法应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术初步筛选LSCC患者中癌组织及癌旁组织表达差异的蛋白。RT-PCR及Western Blot验证iTRAQ初步筛选的结果。根据Western Blot结果,运用统计软件SPSS16.0分析,独立样本t检验验证不同性别LSCC患者中癌组织中YAP的表达情况；卡方检验验证LSCC患者中不同年龄YAP的表达情况；单因素方差分析分别比较在不同TNM分级、临床分期和病理分级LSCC患者中癌组织中YAP的表达情况；独立样本t检验分别比较LSCC患者中发生和未发生淋巴转移,发生和未发生肿瘤复发癌组织中YAP的表达情况；Pearson积差相关的假设检验分析LSCC患者肿瘤体积与肿瘤中YAP的表达量的相关性,以P<0.05为差异有统计学意义。运用shRNA技术使喉癌细胞系HEp-2中YAP的表达量下降,运用流式细胞术检测细胞周期的变化,运用划痕实验观察细胞的迁移能力,运用WST-1检测细胞对铂类化疗药物的耐受情况。结果1.不同性别LSCC患者癌组织中YAP的表达差异有统计学意义(t=2.039,P=0.048)。2.37例LSCC患者癌组织较癌旁组织中YAP表达量高,其中16例小于63岁；7例癌旁组织较癌组织中YAP表达量高,其中6例大于或等于63岁。不同年龄YAP的表达情况,差异无统计学意义(χ2=2.082,P=0.149)。3.YAP在同一患者中癌组织与癌旁组织中的表达存在差异,差异有统计学意义(t=5.239,P=0.000)。4.单因素方差分析比较癌组织中YAP的表达与不同TNM分级LSCC患者中的差异,经LSD(多重组间比较)：T1、T2和T2、T3患者差异有统计学意义(P=0.033、0.045)；T3和T4患者差异无统计学意义(P=0.706)。5.单因素方差分析比较不同的LSCC患者中Ⅰ期、Ⅱ期患者癌组织中YAP的表达量差异有统计学意义(P=0.045)。Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅲ期、Ⅳ期差异无统计学意义(P=0.220、0.930)。6.各病理分级患者癌组织中YAP的表达量差异均无统计学意义(P=0.457、0.710)。7.独立样本t检验比较发生和未发生淋巴转移患者癌组织中YAP的表达情况,差异无统计学意义(t=0.427,P=0.673)。8.独立样本t检验比较发生和未发生肿瘤复发患者癌组织中YAP的表达情况,差异无统计学意义(t=1.178,P=0.860)。9.LSCC患者肿瘤体积与肿瘤中YAP的表达量不具有线性相关性(r=-0.012,P=0.468)。10.细胞免疫荧光技术检测喉癌细胞系HEp-2中YAP的表达情况,显示在喉癌HEp-2细胞系的细胞核及细胞质中均有YAP表达。11.YAP敲除后,HEp-2细胞G2/M期比例由敲除前的(11.232±0.231)%上升为YAP敲除后的(13.810±0.934)%,差异有统计学意义(t=5.545,P=0.005)；S期比例由敲除前的(20.261±0.675)%下降为YAP敲除后的(18.688±0.939)%,差异有统计学意义(t=6.484,P=0.003)；G0/G1期比例由敲除前的(68.206±1.000)%下降为YAP敲除后的(67.502±1.488)%,差异无统计学意义(t=0.876,P=0.430)。YAP敲除后使G2/M期比例增加,周期停滞于G2/M期。12.YAP表达量下降后,HEp-2细胞迁移能力降低,差异有统计学意义(t=5.378,P=0.001)。13.YAP表达量下降后,使喉癌细胞系Hep-2对铂类化疗药物的敏感性增加,差异有统计学意义(t=11.395,P=0.000)。结论YAP在不同性别LSCC患者中发挥不同的作用。YAP参与了LSCC的发生,且作用在LSCC发生的早期。YAP是通过控制细胞周期中G2/M期、S期导致LSCC发生发展的；并且是促进LSCC迁移的原因之一；YAP能使喉癌细胞对铂类化疗药物的敏感性降低。YAP是否可以做为判断LSCC患者病理分级、转移、复发以及肿瘤体积的指标,是否可以作为一个潜在的预后指标及治疗靶点,仍需大量而完善的相关研究加以证明。