人源诺如病毒衣壳蛋白细菌细胞表面展示体系的构建与功能鉴定

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人源诺如病毒(human noroviruses,HuNoVs)是非细菌型急性胃肠炎最主要的病原体之一。由于目前缺乏有效的体外培养模式及小型动物模型,HuNoVs的一些生物学特性尚不明确。重组类病毒粒子(virus-like particles,VLPs)或P粒子常作为HuNoVs替代物,用以研究病毒的免疫学特征以及病毒与其受体之间的相互作用。但是,从环境或食品样品等复杂基质中分离病毒受体时,很难获得HuNoVs及其替代物与病毒受体的复合物,已成为探究病毒受体以及病毒-受体互作机制的瓶颈。为了解决这个瓶颈问题,本研究将HuNoVs GI.1及GII.4毒株主要衣壳蛋白VP1编码基因ORF2或P结构域编码基因(ORF2 3’端)与冰晶核蛋白InaQ N端编码基因inaQn相融合,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、分泌并最终锚定在其细胞表面,成功构建HuNoVs细菌细胞展示体系。以重组菌全细胞酶免疫检测、重组菌与HBGAs结合能力测定、膜蛋白-HBGAs-ELISA等方法对该体系进行验证,结果显示:在冰晶核蛋白InaQN的作用下,HuNoVs GI.1/GII.4重组VP1及P结构域确已锚定在大肠杆菌BL21(DE3)细胞表面;锚定在大肠杆菌细胞表面的重组VP1及P结构域可被其多克隆抗体识别、与病毒受体HBGAs相互作用,且与未融合InaQN的对照菌具有极显著性差异(p<0.01)。另外,细菌细胞展示体系中HuNoVs GI.1及GII.4重组P结构域与重组VP1表现的反应原性及结合受体能力具有显著性差异(p<0.01)。本研究所构建的HuNoVs细胞表面展示体系可用于从样品中发掘并分离出新的HuNoVs病毒受体或特异性结合成分,为探究HuNoVs-受体互作机制提供技术支撑。以该“假人源诺如病毒”模型为平台,也可为制备HuNoVs高效价抗体和开发口服疫苗等生物制品奠定基础。
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