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目的: 前期研究经DADS处理人胃癌细胞,发现miR-7明显上调,且可能参与对胃癌细胞化疗敏感性的调节。现进一步探究DADS上调miR-7对SGC7901细胞化疗敏感性的影响及相关分子机制,证实miR-7是DADS增强胃癌化疗敏感性的作用靶点之一。 方法: 通过培育实验室前期已构建慢病毒miR-7稳定过表达SGC7901细胞(SGC7901/miR-7)及实验室细胞库所存有的SGC7901,SGC7901/VCR细胞。经DADS处理细胞后,运用MTT检测各细胞对5-Fu化疗敏感性;Western blot、免疫荧光、qRT-PCR检测 SGC7901、SGC7901/VCR细胞经 DADS处理前后和SGC7901/miR-7细胞各组EGFR、XIAP、Caspase-3、Bcl-2、P-gp蛋白和mRNA表达的变化,流式检测各组凋亡率。 结果: 1.DADS与miR-7高表达对胃癌细胞5-Fu敏感性的差异。 DADS处理SGC7901、SGC7901/VCR细胞前后组及SGC7901/miR-7、阴性转染组,采用MTT检测各组对5-Fu化疗敏感性的差异。结果表明SGC7901、SGC7901/VCR经DADS(非细胞毒性剂量8mg/L)处理后可增强5Fu对SGC7901、SGC7901/VCR细胞的敏感性(P<0.05),并且miR-7过表达组同样可以增强5Fu对细胞的毒性作用(P<0.05)。 2.DADS与miR-7高表达对胃癌细胞凋亡的影响。 流式凋亡检测显示,经DADS处理后,SGC7901、SGC7901/VCR凋亡率明显增加(P<0.05)。SGC7901/miR-7与阴性转染组比较及正常SGC7901比较,SGC7901/miR-7组凋亡率增加(P<0.05),而阴性转染组与SGC7901比较无统计学意义(P>0.05)。 3.DADS与miR-7高表达对胃癌细胞凋亡相关分子和P-gp表达的影响。 免疫荧光结果显示,EGFR、XIAP、Caspase-3、Bcl-2、P-gp在SGC7901细胞系中主要分布于细胞质中。经DADS处理(30ug/mL)处理后的SGC7901、SGC7901/VCR细胞较未处理组 EGFR、XIAP、Bcl-2与P-gp蛋白阳性信号明显减弱,Caspase-3明显增强。并且SGC7901/miR-7与阴性转染组和未转染组比较,EGFR、XIAP、Bcl-2与P-gp蛋白同样显示阳性信号明显下降,Caspase-3明显增加。Western blot与qRT-PCR实验结果显示,经 DADS处理处理后 SGC7901、SGC7901/VCR细胞,对比未处理组,EGFR、XIAP、Bcl-2与P-gp蛋白与mRNA表达明显下调(P<0.05),Caspase-3明显上调(P<0.05)。而SGC7901/miR-7与阴性转染组和未转染组比较,EGFR、XIAP、Bcl-2与P-gp蛋白与mRNA同样显示明显下调,Caspase-3明显上调(P<0.05)。 结论: 1.DADS可通过上调 miR-7促进 SGC7901细胞凋亡和增强对5-FU的敏感性。 2.DADS与 miR-7可上调 Caspase-3和下调 EGFR、XIAP、Bcl-2与P-gp的表达。