喘可治注射液对支气管哮喘免疫调控作用的临床与实验研究

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研究目的以哮喘免疫治疗的研究热点——Foxp3+ CD4+CD25+调节性T细胞的诱导为切入点,通过临床和实验两方面研究,探讨补肾温阳模式中药(喘可治注射液)在哮喘免疫调控中的作用及其机制。研究方法1.实验研究将Balb/C小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、喘可治(CKZ)组。采取以OVA经腹腔注射致敏加滴鼻激发复制哮喘模型,喘可治组给予喘可治注射液腹腔注射治疗,对照组与哮喘组给予生理盐水腹腔注射。分别观察各组小鼠的肺部病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中EOS情况;流式细胞术检测脾淋巴细胞中Foxp3+CD4+CD25+T细胞/CD4+T细胞比例;免疫组化检测肺组织Foxp3蛋白的细胞表达情况;ELISA检测脾淋巴细胞上清中IL-4、IL-10和TNF-β水平。2.临床研究选取我院呼吸内科50例哮喘患者,随机分为对照组和观察组(CKZ组),对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗基础上加予喘可治注射液肌注足三里(4m1/次,qd),疗程为7天。观测并记录治疗期间主症、PEF、总IgE、EOS、外周血T淋巴细胞亚群的变化。研究结果(一)实验部分1.病理方面:喘可治注射液可降低哮喘小鼠气道周围炎症细胞尤其是EOS的浸润,减轻气道周围平滑肌增生。2.流式细胞术检测方面:哮喘小鼠脾淋巴细胞中Foxp3+CD4+CD25+T细胞/CD4+T细胞比例低于对照组,喘可治注射液可显著提高此细胞比例。3.免疫组化检测方面:哮喘小鼠肺组织Foxp3蛋白的表达低于对照组,喘可治注射液明显提高Foxp3的表达。4.ELISA检测方面:哮喘小鼠脾淋巴细胞上清中存在高IL-4,低IL-10、TNF-β的失衡状态,喘可治注射液可纠正这种失衡的极化状态。(二)临床部分1.疗效方面:喘可治组综合疗效优于对照组,喘可治注射液对寒哮证和虚哮证的疗效优于热哮证,差异有统计学意义(P<0.05)。2.实验室检查指标方面:喘可治注射液可降低哮喘患者外周血EOS及IgE水平,与对照组比较均有统计学差异;治疗前后PEF改善程度与对照组相近。3.实验室检查指标方面:喘可治注射液治疗后,与对照组相比CD4+细胞明显减少,CD8+细胞显著增多,两组相比有统计学意义(P<0.05)研究结论1.哮喘存在Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞相对数量不足和功能缺陷,Thl和Th2之间的失衡参与了哮喘的发病机制;2.喘可治注射液能有效减轻哮喘气道的变态反应炎症;3.以喘可治注射液为代表的补肾温阳中药能抑制Th2细胞的增殖,促进Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞的活化和关健的转录因子Foxp3表达的增加而产生免疫耐受机制,抑制了炎症反应;4.抑制性细胞因子IL-10和TNF-β可能参与了喘可治注射液诱导的Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞免疫抑制作用的机制。
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