【摘 要】
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蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)又名多花兰、夏兰等,为兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidium)草本植物,原产于中国,是我国栽培最久和最普及的兰花之一。蕙兰花小巧精致、芬芳四溢,
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蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)又名多花兰、夏兰等,为兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidium)草本植物,原产于中国,是我国栽培最久和最普及的兰花之一。蕙兰花小巧精致、芬芳四溢,观赏价值和经济价值极高,深受人们喜爱。长期的自然选种使蕙兰野生资源遭到破坏严重,且杂交育种、诱变育种具有周期长等缺点,均不能满足市场需求,而基因工程技术具有目的性强、育种周期短、可克服远缘杂交不亲和障碍等优点,因此成为培育蕙兰新品种的重要手段。目前,国内外对蕙兰的研究报道较少,关于蕙兰基因工程育种方面的研究亦不多。本研究以蕙兰为试验材料,运用基因工程手段分离了蕙兰TCP基因,分析了其序列特征,构建载体转化并对非洲紫罗兰转基因植株进行了性状鉴定,初步阐述了其功能。为培育兰属植物新品种资源提供了理论依据。本研究主要试验结果如下:1.以蕙兰为材料,采用Trizol法提取总RNA,通过RT-PCR、RACE技术从蕙兰中分离得到TCP家族基因CJCIN的cDNA全长序列,并对其序列特征进行分析。结果表明,CfCIN基因全长为1188bp,开放阅读框(ORF)为1161bp,编码386个氨基酸。与其它物种的TCP氨基酸序列比对显示,CfCIN与蝴蝶兰、石斛兰等高度同源,均包含TCP基因家族功能保守域:TCP-domain。系统聚类分析预测该蛋白质属于CIN亚族类蛋白质。2.通过对植物载体pCAMBIA1302及CfCIN基因的酶切位点分析,选用限制性内切酶BglⅡ和SpeI对原有质粒pMD18-CfCIN植物载体pCAMBIA1302进行双酶切。双酶切验证结果表明,成功构建了可供后续遗传转化试验使用的植物表达载体pCAMBIA1302-CfCIN。3.采用农杆菌介导法将蕙兰CfCIN基因转入非洲紫罗兰,经RT-PCR检测证实成功获得转CfCIN基因非洲紫罗兰植株。通过比较转基因和野生型植株表型,初步完成CfCIN基因功能鉴定。
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