海蜇降压肽提取工艺研究与效果测定

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本文首先对不同种类和处理的海蜇分部进行成分和氨基酸测定,海蜇和沙蜇成分相差不大,面蜇和黄斑海蜇的蛋白质含量要低于海蜇;海蜇伞部的总氨基酸含量最多,为127.32 mg/g干重,必需氨基酸含量也达到29.31%。对两种现有降压肽体外测定方法(紫外分光光度法和可见分光光度法)进行了对比研究,前法由于萃取过程中不可控因素较多,精密度太差而致使测定误差较大,且操作麻烦,不宜用于降压肽的测定;可见分光光度法不需从反应体系中提取马尿酸,操作相对简单,灵敏度高、数据稳定,重复性也较好,但当用猪肺粗提ACE酶液时数据不稳定,只有用较纯的ACE酶才能得到比较稳定的测定结果。探索了薄层层析-分光光度法测定降压肽的体外ACE抑制效果的条件,精密度试验的变异系数为2.17%(n =8),此法测定降压肽,重复性好,数据稳定,但操作复杂,步骤繁琐,人为因素影响较大。建立的薄层色谱扫描法,测定简便,准确度高,线性回归方程为:y=20431.098+713.059x ,相关系数r=0.99185。测定精密度的变异系数为0.04%。利用酶解法制备海蜇降压肽,并对工艺参数做了一些探讨。发现腌渍海蜇皮冲洗、匀浆、杀菌后,按50ku/100gPr的添加量加入中性蛋白酶,在45℃水浴中酶解9h,粗滤后通过5kDa的超滤膜时,ACE抑制率最大。100℃浓缩对其影响不大,冷冻会使其ACE抑制率明显降低。体内实验研究了海蜇降压肽对肾动脉狭窄和L-NNA药物致高血压两种高血压模型血压的影响,结果表明:在灌胃剂量小于60mg/Kg.bw剂量范围内,降血压肽的剂量与两种模型的收缩压降压效果均成一定的正相关性。灌胃剂量超过60mg/Kg.bw时,血压下降值都基本趋于平缓。海蜇降血压肽对正常兔子血压无影响。海蜇降压肽五个不同样品的体内和体外测定对比,测定结果基本一致,冰冻使样品降压效果明显减小,而灭菌和浓缩对降压效果影响不大。体外模拟消化作用对海蜇降压肽降压效果影响不大,说明降压肽具有抗消化的能力。脱苦、缓释处理后的体内体外对比发现,先加入0.5%粉末活性炭,55℃下吸附20min,再加入1.5%β-环糊精,于65℃下包埋30min的处理最好,不仅能脱出苦味,而且大大延长了药效,起到了缓释的作用。将海蜇降压肽与四种化学合成药物相比较。体外试验显示:北京降压0号抑制率最低,贝那普利抑制率最高达到64.9%,海蜇降压肽次之,而缬沙坦和伲福达没有抑制效果。体内试验:在灌胃剂量正常条件下,钙离子拮抗剂伲福达不能对肾动脉狭窄高血压模型起到降压效果;海蜇降压肽比缬沙坦降血压肽作用时间较快,维持时间较短,但如果加大剂量也会达到与缬沙坦维持时间相同的效果;与盐酸贝那普利相比,贝纳普利降压幅度较大些,但加大剂量会引起低血压,这样大的落差对高血压病人是极为不利的。而降血压肽不会出现这种情况。进行海蜇降压肽的放大试验,并对样品做了体内体外测定。在体内测定中,D9和E10均能使高血压降至正常值,且维持时间在20个小时。体外测定D9和E10的抑制率分别为67.3%和61.5%,其它样品则抑制率较小。
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