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以大连地区移栽自庐山植物园的三尖杉(Cephalotaxus)植株为原料,就外植体种类、基本培养基种类、激素种类和浓度等因素对愈伤组织诱导、生长的影响进行了系统的研究和归纳,目的是建立和优化获得有效生物碱成分的三尖杉愈伤组织的培养技术和方法,结果表明幼茎外植体因其出愈率早、诱导率高而最佳;培养基MS+NAA3.0mg/L+KT0.1mg/L为最佳诱导培养基,其诱导率达91%;继代培养基中一定浓度的NAA(1.0-3.0mg/L)有利于愈伤组织的产生,但是高浓度的NAA(8.0mg/L)则对愈伤组织的生长有抑制作用。其在MS基础培养基上较在B5和1/2MS培养基上褐化轻,生物量增长快;冬季诱导的愈伤组织,其诱导率普遍高于夏季所诱导的愈伤组织。利用诱导出的愈伤,成功地建立起了三尖杉细胞悬浮培养体系。
研究了三尖杉细胞悬浮培养的动力学规律,包括细胞的生长和碳源、氮源的吸收情况;结果表明,从培养工艺上看细胞大致可分为指数生长期、恒速生长期及减速生长期,培养周期约为30天,最大生物量达到10.1g·l-1;在此基础上,考察了接种量对三尖杉细胞生长时间进程的影响,结果表明,随着接种量的增加,培养周期有缩短的迹象。
研究了总生物碱的提取工艺;超声波提取和微波提取的效果要略微低于索氏提取,但提取时间可大大缩短。此外,干细胞的粒度大小也对提取率有较大影响。通过HPLC分析表明我们所建立起的悬浮体系中含有一定量的目的成分之一高三尖杉酯碱,这表明我们的研究是有意义的。