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背景:骨肉瘤是临床上最常见的恶性骨肿瘤之一,因为它的恶性程度较高、容易发生转移所以预后较差。骨肉瘤的传统治疗方法是手术治疗,但其治疗效果一般且5年生存率不足20%,新辅助化疗（即术前及术后化疗）配合手术使得患者5年生存率提高到60%,但随着骨肉瘤对化疗药物耐受的情况出现,近年来骨肉瘤的诊治手段未有较大突破。1936年,首次从雷公藤根部发现并获取雷公藤红素,后经研究其具有抗肿瘤、抗炎、免疫抑制等多种生物活性,目前已成为中药抗肿瘤方面的研究热点。在对多种肿瘤及在多个方面中,雷公藤红素已经显示出其抗肿瘤的能力。目的:1.检测雷公藤红素对于骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭表型的影响;2.分析HMGCR在骨肉瘤中的表达情况,明确雷公藤红素处理后影响HMGCR的活性从而抑制骨肉瘤细胞;3.明确雷公藤红素通过甲羟戊酸途径调控Rho A从而抑制骨肉瘤细胞活性;4.明确雷公藤红素通过甲羟戊酸途径诱导Rho A失活导致YAP1活性降低从而抑制骨肉瘤细胞活性。方法:1.采用CCK-8检测雷公藤红素的浓度与细胞存活率之间的关联;利用Hoechst染色及Western blot检测雷公藤红素对骨肉瘤细胞凋亡的影响;利用24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测雷公藤红素对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响。2.通过生信技术分析HMGCR的表达与临床生存率间的关联;采用Western blot检测HMGCR在骨肉瘤细胞系中的表达情况及雷公藤红素处理后骨肉瘤细胞中HMGCR的表达变化;利用Hoechst染色及Western blot测试雷公藤红素、甲羟戊酸及辛伐他汀对骨肉瘤细胞程序性死亡产生何种影响;利用24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验测试雷公藤红素、甲羟戊酸及辛伐他汀对骨肉瘤143B细胞迁移及侵袭水平的影响。3.通过生信技术分析在骨肉瘤样本中HMGCR和Rho A表达之间的关系;采用Western blot检测Rho A在骨肉瘤细胞系中的表达情况及雷公藤红素和甲羟戊酸处理后骨肉瘤细胞中Rho A的表达变化;运用慢病毒转染技术构建敲减Rho A和过表达Rho A的骨肉瘤稳转株,并采用Western blot进行验证;利用Western blot检测敲减Rho A和过表达Rho A联合雷公藤红素对骨肉瘤细胞凋亡的影响;利用24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测敲减Rho A和过表达Rho A联合雷公藤红素对骨肉瘤143B细胞迁移及侵袭水平的改变。4.通过生信技术分析在骨肉瘤样本中Rho A和YAP1表达之间的关系;采用Western blot检测YAP1在骨肉瘤细胞系中的表达情况及雷公藤红素、甲羟戊酸及敲低和过表达Rho A处理后骨肉瘤细胞中YAP1的表达变化;运用慢病毒转染技术构建敲减YAP1和过表达YAP1的骨肉瘤稳转株,并采用Western blot进行验证;利用Western blot检测敲减YAP1和过表达YAP1联合雷公藤红素对骨肉瘤细胞凋亡的影响;利用24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测敲减YAP1和过表达YAP1联合雷公藤红素对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:1.CCK-8结果显示雷公藤红素明显抑制骨肉瘤细胞的活性,且随着雷公藤红素剂量的增高骨肉瘤细胞的活性也随之降低,其中IC50值约为3.2μM;利用Hoechst染色及Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示雷公藤红素显著促进骨肉瘤细胞凋亡;24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验结果显示雷公藤红素显著抑制骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力。2.生存分析结果显示表达较低水平HMGCR的肉瘤患者的平均存活时间显著长于表达较高水平HMGCR的患者;Western blot实验结果显示HMGCR在骨肉瘤细胞系中的表达显著高于成骨细胞系且雷公藤红素显著抑制骨肉瘤细胞中HMGCR的活性;Hoechst染色及Western blot检测结果显示雷公藤红素、辛伐他汀能显著促进骨肉瘤细胞的凋亡,而甲羟戊酸与之相反;24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验结果显示雷公藤红素、辛伐他汀能显著抑制骨肉瘤细胞的迁移及侵袭能力,而甲羟戊酸与之相反。3.生物信息学分析结果显示,在骨肉瘤样本中HMGCR和Rho A表达之间存在正相关联系;Western blot结果显示Rho A在骨肉瘤细胞系中的表达显著高于成骨细胞系,雷公藤红素显著抑制骨肉瘤细胞中Rho A的活性而甲羟戊酸的作用与之相反;敲减Rho A联合雷公藤红素能进一步促进骨肉瘤细胞凋亡水平,而过表达Rho A能消除雷公藤红素对骨肉瘤细胞的影响;24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验显示敲减Rho A联合雷公藤红素能进一步抑制骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力,而过表达Rho A能消除雷公藤红素对骨肉瘤细胞的影响。4.生物信息学分析结果显示,在骨肉瘤样本中Rho A和YAP1表达之间存在正相关联系;Western blot结果显示YAP1在骨肉瘤细胞系中的表达显著高于成骨细胞系,雷公藤红素、敲低Rho A显著抑制骨肉瘤细胞中YAP1的活性而甲羟戊酸、过表达Rho A的作用与之相反;敲减YAP1联合雷公藤红素能进一步促进骨肉瘤细胞凋亡水平,而过表达YAP1能消除雷公藤红素对骨肉瘤细胞的影响;24h划痕愈合实验及Transwell侵袭实验显示敲减YAP1联合雷公藤红素能进一步抑制骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力,而过表达YAP1能消除雷公藤红素对于骨肉瘤143B细胞的影响。结论:1.雷公藤红素可明显降低骨肉瘤细胞的活性,且随着雷公藤红素剂量的增高骨肉瘤细胞的活性也随之降低;2.HMGCR在骨肉瘤细胞中表达显著高于成骨细胞,雷公藤红素通过抑制HMGCR降低骨肉瘤细胞活性;3.雷公藤红素通过甲羟戊酸途径调节Rho A活性从而抑制骨肉瘤细胞4.雷公藤红素通过甲羟戊酸途径诱导的Rho A失活导致YAP1活性降低从而抑制骨肉瘤细胞。