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目的:研究人胎盘源间充质干细胞(human placenta derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)对GVHD模型IL-27水平及Thl、Th2和CD4+IL-1O+T细胞亚群转化的影响;探讨IL-27对hPMSCs黏附、增殖和迁移以及对其诱导Thl、Th2和CD4+IL-10+T细胞亚群转化的调节机制。方法:(1)采用6-8周龄的非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠(NOD/SCID)构建人源化GVHD模型,随后用hPMSCs干预治疗。分别于治疗后第7、14天将小鼠处死取材。(2)流式微球阵列(Cytometric Bead Array,CBA)检测血清中IFN-γ、IL-4、IL-10 及 ELISA 检测 IL-27 水平。(3)苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察肺脏、肾脏的组织形态学改变。(4)流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析脾细胞、肝细胞中 Thl(CD4+IFN-γ+T)、Th2(CD4+IL-4+T)以及CD4+IL-1O+T 细胞比例变化。(5)逆转录 PCR(Reverse-transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、基因测序以及蛋白质免疫印迹(Westen blot)、FCM分别检测IL-27Rα在hPMSCs上的表达。(6)实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)仪实时动态检测IL-27对hPMSCs黏附、增殖和迁移的调节作用。(7)FCM检测IL-27对hPMSCs诱导T细胞向Thl、Th2以及CD4+IL-1O+T细胞转化的调节作用。(8)IL-27 对 hPMSCs 上程序性死亡配体 1(programmed death ligand 1,PDL1)的调节作用及其信号通路通过FCM及Westen blot分析。结果:1.hPMSCs可改善人源化GVHD小鼠的临床症状(1)成功构建人源化GVHD小鼠模型。(2)相比于GVHD模型组,hPMSCs治疗组小鼠体重明显增加(P<0.001),临床行为学评分显著降低(P<0.001),生存期明显延长(P<0.001)。HE结果显示,与PBS对照组相比,hPMSCs治疗组小鼠肺脏、肾脏的病理改变减轻。(3)FCM结果表明,与PBS对照组相比,hPMSCs治疗7天后小鼠脾细胞、肝细胞中Th2以及CD4+IL-10+T细胞显著升高(P<0.01)而Th1比例明显下降(P<0.01),且hPMSCs治疗14天后效果更加显著(P<0.01)。(4)细胞因子结果显示,GVHD发生时小鼠血清IL-27、IFN-γ、IL-4、IL-10水平升高(P<0.01);与PBS对照组相比,hPMSCs治疗7天后IL-4及IL-10水平明显提高(P<0.01),而IL-27、IFN-y水平明显降低(P<0.01);且hPMSCs治疗14天后细胞因子改变更加显著。然而IL-27与IFN-γ、IL-4、IL-10无相关性。2.IL-27可调节hPMSCs的黏附、增殖、迁移及促进hPMSCs调节CD4+T细胞转化(1)RT-PCR、Westen blot、FCM以及基因测序结果均表明hPMSCs表达IL-27Rα。(2)30 ng/ml 的 IL-27 明显抑制 hPMSCs 的黏附和增殖,20 ng/ml 和 30 ng/ml的IL-27均能促进hPMSCs的迁移。(3)IL-27上调hPMSCs对植物血凝素(PHA)活化的PBMC向Th2细胞亚群转化的促进作用、增强其抑制PBMC向Thl细胞亚群转化的能力;增强hPMSCs对CD4+T细胞分泌IL-10的诱导作用。(4)IL-27可通过JAK/STAT1信号通路上调PDL1在hPMSCs上的表达。结论:1.hPMSCs可通过诱导Thl、Th2细胞转化及CD4+T细胞分泌IL-10,降低IL-27水平,进而减轻GVHD小鼠的临床症状。2.IL-27对hPMSCs的黏附、增殖和迁移具有明显的调节作用,且IL-27可通过JAK/STAT1通路上调PDL1在hPMSCs上的表达,进而增强hPMSCs对Thl、Th2转化及CD4+T细胞分泌IL-10的调节效应。