色素痣细胞体外培养和构建含痣细胞的组织工程皮肤

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目的: 在体外对色素痣细胞(nevus cell)进行培养,并构建含痣细胞的组织工程皮肤。  方法: 1.采用两步酶消化法处理色素痣,弃表皮后,用0.2%Ⅳ型胶原酶溶液消化真皮,获得细胞悬液,用完全黑素细胞培养基M-254培养痣细胞,G418纯化后传代。2.将痣细胞传至第3代,制作细胞爬片,1天后进行S-100、NSE、HMB-45免疫组化染色。3.制备人去表皮的真皮(DED),将第3代痣细胞制成细胞悬液,接种于DED表面,采用液下培养3天后,取培养的组织工程皮肤分别做HE染色、S-100、NSE免疫组化染色。  结果: 1.在体外成功培养出痣细胞,倒置显微镜下观察呈树枝状,折光性强,痣细胞爬片1天后,行S-100、NSE、HMB-45免疫组化染色阳性。2.第3代痣细胞消化后接种于DED,接种痣细胞后3天肉眼观察DED表面光滑,颜色无明显变化,未见突起的增生物。3.培养3天后取出培养的组织工程皮肤,行HE染色显示痣细胞胞质呈蓝染,少部分可见黑素颗粒,免疫组化染色检查显示:痣细胞在DED表面的基底膜带上生长分布,并在凹陷处形成大小不等团、灶;在皮肤附属器管壁内,呈环形、带状生长;在DED侧面及底面,痣细胞弥散性浸润生长。组织中痣细胞S-100、NSE染色阳性。  结论: 1.在原培养方法的基础上改进,在体外成功培养出痣细胞。2.通过皮肤器官培养的方式,可构建皮肤色素痣的体外模型。
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