表没食子儿茶素没食子酸酯对牛卵母细胞体外成熟和冷冻精液品质的影响

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yakataxxxx
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活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)在维持哺乳动物雌雄配子正常的生理功能方面发挥着重要作用,但过量ROS会导致氧化应激从而对哺乳动物雌雄配子造成损伤。表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是茶叶中儿茶素的一种主要成分,因其具有强抗氧化特性而被认为最有前景的生物活性物质之一,它能清除ROS从而提高雌雄配子质量。因此,本研究在牛体外卵母细胞成熟液和冷冻-解冻后精液中添加不同浓度的EGCG探究其对牛卵母细胞体外成熟和冷冻精液品质的影响。研究结果如下:  1、探究牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度EGCG(0、25、50、100、200μM)对牛卵母细胞核成熟和胞质成熟、卵丘扩展、ROS水平、总抗氧化能力、早期凋亡和体外受精后早期胚胎发育能力的影响,并检测卵母细胞内抗氧化相关基因表达探究其可能的作用机制。结果表明:(1)与对照组相比,50μMEGCG显著提高牛卵母细胞第一极体排出率、皮质颗粒外周和皮质区分布的卵母细胞百分率和线粒体均匀分布的卵母细胞百分率(P<005)。(2)与对照组相比,25μM和50μMEGCG显著提高卵丘扩展指数,50μMEGCG处理显著促进卵丘扩展基因(HAS2、TNFA IP6、PTX和PTGS2)mRNA表达(P<0.05)。(3)与对照组相比,50μMEGCG处理不仅显著降低牛卵母细胞内ROS水平和早期凋亡卵母细胞比例,还显著提高牛卵母细胞总抗氧化能力(P<0.05)。(4)50μMEGCG处理组牛卵母细胞体外受精后早期胚卵裂率和囊胚率显著高于对照组(P<0.05)。(5)50μMEGCG处理组牛卵母细胞中抗氧化相关基因(NRF2、SOD1、CAT和GPX4)mRNA表达量显著高于对照组(P<005)。  2、牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度EGCG(0、5、10、20μM)385℃孵育1h后对精子活力及运动学参数、结构完整性、精子中抗氧化相关酶活力、MDA含量和体外受精后早期胚胎发育能力进行检测。结果表明:(1)10μM EGCG处理组精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz)显著高于对照组(P<0.05)。(2)与对照组相比,5μM,10μM和20μEGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P<005);5μM和10μM EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P<005)。(3)与对照组相比,10μM EGCG处理能够显著提高精子中SOD和CAT活力,降低LDH活力和MDA含量(P<005),但AST活力无显著变化;20μM EGCG处理组SOD和CAT活力显著升高,AST活力显著下降,而MDA含量显著升高(P<0.05)。(4)10μM和20μM EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P<005)。  本研究发现50μMEGCG能够促进牛卵母细胞体外成熟,10μM EGCG能够提高牛冷冻精液品质,其作用机制可能与抗氧化酶(基因)表达相关,从而为提高牛体外胚胎生产效率提供理论依据。
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