【摘 要】
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二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA),属于ω-3系列多不饱和脂肪酸(PUFAs),是人体必需的一种多不饱和脂肪酸。DHA具有促进婴幼儿脑部的发育、保护视力、预防心脑血管疾
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二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA),属于ω-3系列多不饱和脂肪酸(PUFAs),是人体必需的一种多不饱和脂肪酸。DHA具有促进婴幼儿脑部的发育、保护视力、预防心脑血管疾病等生理功能。同时,DHA已经被广泛应用于食品、饲料以及药品等方面。鱼油作为DHA的传统来源其缺点日渐凸显,而寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)是目前较为理想的一种DHA生产菌,其DHA含量较高,而其他不饱和脂肪含量较少,有利于纯化和工业化的应用。首先,本研究对寇氏隐甲藻进行了分离纯化,主要采用了稀释分离法、固体平板涂布分离法、划线分离法等;对寇氏隐甲藻进行保存,采用了固液双向保存、液体继代保存、低温保存和斜面保存等;对藻株CCMP316进行了分子生物学鉴定,确定该藻株为寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii);采用美国BD FACSymphony A5流式细胞仪测定了寇氏隐甲藻的基因组大小约为3005.64 Mb左右。其次,采用超声波破壁法提取油脂,对超声时间、输出功率、浸提溶剂、液料比进行了优化;结果表明,优化后油脂得率为42.78%,较优化前的32.22%提高了10.46%;通过单因素实验和响应面实验对寇氏隐甲藻的培养基进行优化,优化结果表明:葡萄糖、酵母粉、醋酸钠为显著影响因子;优化后葡萄糖、酵母粉、醋酸钠的浓度分别为25.31 g/L、2.5 g/L、4.25 g/L,在最优条件下DHA的产量为2.14g/L,较优化前提高了 10.71%。最后,对寇氏隐甲藻进行紫外诱变、化学诱变(诱变剂为NTG)以及ARTP诱变;用碘乙酸和丙二酸作为筛选剂,建立磷酸香草醛快速测定油脂含量的方法,挑选诱变藻株进行比较,得到3株突变藻株分别为UZ-3、NZ-11、AZ-14,比较3株突变藻株,得到最优突变藻株AZ-14,对突变藻株AZ-14进行遗传稳定性研究。
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