大豆microRNA1510a的表达分析及功能鉴定

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:redlong888
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目前,土地盐碱化、干旱化等问题正在不断加剧,这些都是严重影响农作物产量和导致生态环境恶化的主要因素,所以,如何能够充分有效的利用这些土地,增加粮食产量等问题都是需要我们迫切解决的。研究表明,植物在多种逆境胁迫条件下的生长过程中均有microRNA的参与,它对植物生长发育、抗逆境胁迫应答以及病原性等方面起到重要作用。MicroRNA(miRNA):是一类在生物体中内源的、普遍存在的、非编码的小分子单链RNA,长度约为21-24nt,在动植物中,miRNA主要通过与靶基因碱基互补配对的方式相结合,使其降解或者抑制其翻译,从而对植物进行生理和形态上的调控。本实验通过高通量测序的方法,从大豆逆境胁迫miRNA表达谱中挑选出在逆境胁迫中表达量较高的大豆miRNA1510a (Gma-miRNA1510a)作为研究对象,对大豆miRNA1510a进行表达分析和功能鉴定。具体研究结果如下:1.将大豆植株进行逆境胁迫处理,通过实时荧光定量PCR的方法验证了在逆境胁迫中,不同时间段大豆叶片里miRNA1510a表达变化情况。结果表明:在NaCl、NaHCO3、 NaCl与NaHCO3、PEG胁迫处理下,大豆叶片中miRNA1510a的表达量均上调,初步推测出大豆miRNA1510a对盐、碱、盐碱、干旱都能产生应答,且是盐强诱导基因,参与植物逆境胁迫调节过程。2.通过双酶切的方法,将miRNA1510a前体基因成功构建到pBASTA表达载体中,利用农杆菌介导法转入拟南芥,获得25株T1代转基因拟南芥。对T2代转基因拟南芥进行分离比统计实验,结果符合孟德尔遗传定律3:1的比值,可以确定得到了单拷贝转基因拟南芥植株。3.对T3代转基因拟南芥株系3、株系4以及野生型拟南芥进行NaCl、NaHCO3、NaCl与NaHCO3、PEG逆境胁迫处理实验,通过观察拟南芥的种子萌发率和表型变化情况来验证转基因植株的抗逆性。结果发现,转基因拟南芥与野生型拟南芥相比较,有明显的抗盐能力,抗碱、盐碱、干旱能力不明显。4.通过农杆菌介导大豆子叶节转化法,将miRNA1510a前体基因转入大豆,获得8株T0代转基因大豆。
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