【摘 要】
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多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一类败血性革兰氏阴性致病菌,可以感染多种动物,使其产生不同程度的损伤。在猪中主要引起猪肺疫和猪萎缩性鼻炎,给养猪业带来了巨大的危害。目前该病的防控主要依赖于药物治疗及疫苗免疫,但随着抗生素的大量使用,耐药性问题愈加多见,这无疑加大了猪多杀性巴氏杆菌病预防控制的难度。因此,本实验通过收集临床发病猪的口鼻拭子及组织病料,对来自不同地区
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多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一类败血性革兰氏阴性致病菌,可以感染多种动物,使其产生不同程度的损伤。在猪中主要引起猪肺疫和猪萎缩性鼻炎,给养猪业带来了巨大的危害。目前该病的防控主要依赖于药物治疗及疫苗免疫,但随着抗生素的大量使用,耐药性问题愈加多见,这无疑加大了猪多杀性巴氏杆菌病预防控制的难度。因此,本实验通过收集临床发病猪的口鼻拭子及组织病料,对来自不同地区规模化养殖场的猪多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定及生物学特性分析,评估目前我国部分地区养殖场猪多杀性巴氏杆菌的优势血清型菌株;通过生物信息学分析发现在不同源性多杀性巴氏杆菌及猪源多杀性巴氏杆菌不同血清型菌株中存在高度保守的ompW、tbpA基因,通过原核表达对OmpW、TbpA蛋白进行克隆表达,为猪多杀性巴氏杆菌候选免疫原性蛋白提供基础。具体内容如下:1.猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定为了探究猪多杀性巴氏杆菌在规模化猪场的流行情况,首先对来自广西、湖北、内蒙古3个地区规模化猪场中患有呼吸道症状发病猪只的口鼻拭子及组织病料进行病原菌的分离培养、染色镜检、生化鉴定及PCR检测鉴定,结果显示分离得到6株多杀性巴氏杆菌,其中荚膜血清A型1株（命名为GX-Pm A）,荚膜血清D型5株（命名为GX-Pm D1、GX-Pm D2、GX-Pm D3、GX-Pm D4、NMG-Pm D5）。选取20种常见药物进行药敏实验,结果显示GX-Pm D1、GX-Pm D2、GX-Pm D3、GXPm D4未见耐药现象,而NMG-Pm D5表现出明显的新霉素及庆大霉素耐药现象。小鼠致病力实验结果表明荚膜血清A型菌株毒力强于荚膜血清D型菌株,通过攻毒后小鼠死亡数量时间及病理变化,成功筛选出了毒力较强的GX-Pm A及GX-Pm D4菌株。2.猪多杀性巴氏杆菌候选免疫原性蛋白OmpW、TbpA的克隆表达通过对ompW、tbpA基因及其表达产物进行生物信息学分析,证实了这两个基因的高度保守性,蛋白质理化性质分析结果表明OmpW属于疏水类蛋白质,TbpA蛋白属于亲水类蛋白质,并成功预测了两个蛋白的信号肽、跨膜区、抗原表位、二级结构及三级结构。基于此,成功构建了猪源多杀性巴氏杆菌OmpW、TbpA蛋白的重组表达载体p ET28a-ompW、p ET28a-tbpA、p SUMO-ompW、p SUMO-tbpA,通过筛选及条件优化成功得到了可溶性表达的OmpW蛋白,为猪多杀性巴氏杆菌新型疫苗研制奠定基础。
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