猪的遗传改良一直是养猪业界科技工作者关注的重点,传统育种手段在猪的品种改良方面取得了显著成效。随着生命科学技术的发展,尤其是分子生物学领域的不断突破,分子育种将成为猪遗传改良的重要手段。任何经济性状的形成都是受复杂的遗传调控。蛋白质是生命活动的具体执行者,泛素—蛋白酶体途径是一种重要的蛋白质降解系统,是调节细胞内蛋白质水平的重要机制。通过降解许多诸如细胞周期因子、转录因子等蛋白,从而参与调节许多重要的生命活动。泛素蛋白酶体途径最主要的特征就是底物的多样性和选择性,而这一功能主要是由泛素—蛋白连接酶E3s的F-box基序直接决定的。本研究利用生物信息学与分子生物学技术相结合的方法,克隆获得了猪F-box家族的FBXO8基因,初步取得了如下结果:1.利用网络数据库的信息,通过生物信息学手段,电子克隆到猪FBXO8基因的编码序列并对其进行了系统的生物信息学研究。2.结合猪EST数据库的信息,分离并鉴定了猪FBXO8的功能序列。3.用RT-PCR的方法,对猪FBXO8基因进行了组织表达谱分析。结果发现这个基因在所检测的成年五指山猪16个组织中有8个组织有不同程度的表达。4.使用pEGFP-N1载体构建了人源、猪FBXO8的亚细胞定位载体。在人肺腺癌细胞系(A549)、猪肾细胞(PK15)上分别进行了人、猪亚细胞定位的研究。由人源FBXO8的亚细胞定位显示,FBXO8主要分布在细胞质中。5.构建了猪pcDNA-3.1—FBXO8过表达载体,通过转染猪肾细胞(PK15),并提取转染后的32小时细胞RNA,利用用RT-PCR验证了过表达水平,为后续的细胞生物学功能研究奠定了基础。6.成功构建了猪FBXO8原核表达载体,对猪FBXO8蛋白水平的功能进行了初步的研究,为后续的研究打下了基础。