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研究目的:乳腺癌是最全球女性恶性肿瘤中最常见的癌症,复发和转移是影响乳腺癌患者预后和导致患者治疗失败最重要的原因。探究影响乳腺癌转移的细胞学基础和分子机制,是目前乳腺癌领域的热点研究方向。研究表明,恶性肿瘤的侵袭、转移与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)密切相关。因而,探究EMT与恶性肿瘤转移之间的分子机制,对于预防和治疗癌症具有重要意义。Scinderin(肌切蛋白,以下简称SCIN)是一种Ca2+依赖的丝状肌动蛋白(F-actin)切割蛋白,通过调控丝状肌动蛋白(F-actin)的聚合和解聚,影响细胞骨架重构。近来研究表明:SICN参与多种恶性肿瘤的发生、发展,并与恶性肿瘤细胞及肿瘤干细胞的EMT调控可能相关。但是在乳腺癌中鲜有报道,我们在前期研究中发现SCIN低表达与乳腺癌增殖、侵袭及患者不良预后正相关;但其具体机制不明。Wnt/β-catenin信号通路是目前研究比较热门的通路,被认为与肿瘤的发生、发展相关。本研究将在前期工作的基础上,进一步探索SCIN是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控EMT从而影响乳腺癌进展、转移的分子机制。研究方法:1.构建SCIN-shRNA慢病毒干扰载体并感染人乳腺癌细胞株MCF-7,利用Western blot实验检验SCIN的沉默效果,从而构建SCIN低表达的稳定乳腺癌细胞株MCF-7。2.运用Western Blot检测分析沉默SCIN对MCF-7细胞的E-cadherin和N-cadherin等EMT标志分子表达的影响及Wnt3a、β-catenin和GSK-3β等Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。3.将构建好的转染了Lv-shSCIN慢病毒载体的MCF-7细胞、转染了无义序列慢病毒载体的阴性对照(Lv-shCON)两组细胞进行扩增。分别将扩增好的细胞制备成细胞悬液,并注射于裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型,观察沉默SCIN对MCF-7细胞的成瘤能力的影响。4.取出裸鼠皮下瘤体,运用Western Blot检测分析SCIN沉默的MCF-7细胞系成瘤的瘤体中的SCIN及E-cadherin和N-cadherin等EMT标志分子表达的影响及Wnt3a、β-catenin和GSK-3β等Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:1.慢病毒载体成功转染乳腺癌MCF-7细胞,Western bolt实验结果显示转染了Lv-shSCIN慢病毒载体的MCF-7细胞内Scinderin的蛋白质表达水平较对照组显著降低(P<0.001)。由此证实,成功构建了稳定低表达Scinderin的乳腺癌细胞株MCF-7。2.Western Blot实验结果显示,SCIN沉默的MCF-7细胞内E-cadherin表达水平显著降低(P<0.001),而N-cadherin的表达水平显著升高(P<0.001)。SCIN沉默的MCF-7细胞内β-catenin、Wnt3a蛋白质表达水平明显升高(P<0.01),而GSK-3β的表达水平显著降低(P<0.05)。3.裸鼠皮下移植瘤实验结果显示,无论SCIN沉默与否,皮下注射4周后均能长成移植瘤,但SCIN沉默的MCF-7细胞系成瘤的瘤体的体积及重量较对照组显著增大。4.Western Blot实验结果证实,瘤体组织蛋白表达水平与细胞内蛋白表达水平保持一致:SCIN沉默的MCF-7细胞系成瘤的瘤体内SCIN、E-cadherin表达水平显著降低(P<0.05),而N-cadherin的表达水平显著升高(P<0.05)。SCIN沉默的MCF-7细胞系成瘤的瘤体内β-catenin、Wnt3a蛋白质表达水平明显升高(P<0.05),而GSK-3β的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:1.沉默SCIN促进乳腺癌MCF-7细胞裸鼠成瘤能力;2.沉默SCIN可增强乳腺癌细胞株MCF-7的EMT进程,促进癌细胞的侵袭力、增殖及迁移能力;3.沉默SCIN可能通过Wnt/β-catenin信号通路调控EMT进程从而促进癌细胞的侵袭、增值及迁移能力。4.该研究提示,SCIN参与调控乳腺癌细胞的EMT进程,与乳腺癌细胞的转移密切相关。这为阐明乳腺癌转移的机制提供了新思路,对乳腺癌转移和复发的诊断、治疗、预防具有潜在的实用价值。