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海绵体神经(CN)损伤致勃起功能障碍(ED)在临床上时有发生，在前列腺癌根治术后尤为常见。20世纪80年代，Walsh和Donker首先设计并开展了保留CN的前列腺癌根治术，但即便如此，仍然有相当一部分患者术后自主勃起功能不能恢复，因此，此类ED的发生可能并不仅仅与CN损伤有关。另一方面，还有部分患者由于控制肿瘤的需要，在术中不得不切除双侧CN，这部分患者自主勃起功能的恢复，仅通过传统治疗方法几乎不可能达到。本研究利用大鼠建立CN损伤动物模型，模拟前列腺癌根治性切除术后，CN受损伤患者，在此基础上，探讨CN损伤致ED的发病机制和病理生理过程，以及重建勃起反射通路恢复勃起功能的可行性，为临床寻求理想的预防和治疗方法提供理论和实验依据。全文分四部分，第一部分主要在解剖学上探讨了大鼠阴茎的自主神经支配，及阴茎的组织结构特点，提出了用大鼠建立相关动物模型应该注意的几个问题；第二部分在前一部分的基础上，建立双侧CN不同程度损伤大鼠模型，探讨了不同程度CN损伤对阴茎组织nNOS和eNOS表达的影响；第三部分研究了阴茎在完全去自主神经支配状态下，阴茎组织结构的变化及其机制；最后一部分探讨自体静脉移植搭桥重建勃起反射通路恢复勃起功能的可行性。 第一部分：大鼠盆腔神经解剖及海绵体神经损伤动物模型建立的相关研究 1．大鼠阴茎自主神经支配的解剖学及其意义的研究 目的：探讨大鼠阴茎CN侧支对阴茎勃起的作用及对建立CN损伤动物模型的影响。材料和方法：36只雄性SD大鼠(3～5个月龄)，其中6只在外科显微镜下详细解剖盆腔神经节及其分支；另30只大鼠随机分成三组：Ⅰ假手术组，Ⅱ双侧CN主支切断组和Ⅲ双侧CN主支和侧支均切断组。分别于术后第7天和第30天皮下注射阿朴吗啡，观察0.5h内阴茎勃起情况。然后，在大鼠阴茎海绵体内注射神经示踪剂荧光金，5天后取大鼠盆腔神经节，冰冻切片后，荧光显微镜下观察。结果：在前列腺背侧叶表面，盆腔神经节向尿道膜部的方向发出的CN主支和数根极为细小的分支。第7天，Ⅰ组勃起次数平均为2.0±0.7，而Ⅱ、Ⅲ无大鼠有勃起反应(0.0±0.0)；30天后，Ⅱ组大鼠大多数有勃起反应(0.9±0.7)，与Ⅲ组(0.0±0.0)比有显著性差异(P＜0.05)，但仍低于Ⅰ组(2.8±0.6) (P<0.05)。荧光显微镜下计数，11组盆腔神经节中可见较多荧光金阳性着色细胞，而m组只可见极少数荧光金阳性着色细胞(P<0.01细。结论:大鼠盆腔神经节发出的细小分支中含有对阴茎勃起有部分支配作用的CN侧支，建立大鼠CN损伤ED动物模型时应考虑CN侧支的影响。 2.阴茎背神经中的NOS阳性神经纤维与自主神经系统关系的研究 目的:探讨阴茎背神经(PDN)中的一氧化氮合酶(NOS)阳性神经纤维的来源及其与阴茎自主神经系统的联系。材料和方法:在外科显微镜下对雄性成年SD大鼠行无菌手术，分别建立单侧和双侧CN(包括主支和侧支)切断模型，以假手术组作为对照;2周后取阴茎中段标本冰冻切片，并行NADPH黄递酶染色，在显微镜下着重观察PDN中的阳性纤维，并在高倍镜下计数每只大鼠每侧PDN中阳性纤维的数目。结果:6只对照大鼠双侧PDN中皆有丰富的NOS阳性神经，平均每侧70.3士14.8(护12)，而7只双侧切断组大鼠平均每侧只有2.7土2.9(n二14)，两组比较P<0.001 .6只单侧切断组大鼠cN切断侧和保留侧PDN中阳性纤维平均分别为1.2士1.6和63.8士13.8(n二6)，两侧比较P<0.001。结论:CN切除会使同侧PDN中的NOS阳性神经纤维几乎消失，大鼠PDN中的NOS阳性纤维实际上来源于自主神经系统。 3.大鼠与人阴茎结构的差异及其对建立单侧海绵体神经损伤模型的影响 目的:比较大鼠与人阴茎组织结构的差异，证明大鼠不宜用于建立单侧CN损伤模型。材料和方法:对4只雄性成年SD大鼠阴茎组织标本进行切片(横切)，用Masson三色染色法对其中平滑肌和胶原纤维进行染色，免疫组织化学法对其中阳性NOS神经纤维进行染色;另从两具小而男性尸体上取阴茎组织标本，石蜡包埋切片(横切)，同样行Masson三色染色。结果:大鼠双侧阴茎海绵体之间从近端截面到远端截面基本上都是相联通的，平滑肌、海绵窦和NOS 阳性神经纤维从一侧阴茎海绵体连续地分布到对侧，其间没有阴茎中隔;而人 的双侧阴茎海绵体之间从近端截面到远端截面几乎都有完整的阴茎中隔。结论:大鼠双侧阴茎海绵体是相通的，一侧CN离断后，NOS神经纤维有可能从未损伤侧爬行到对侧;而对于只有一侧CN保留的前列腺癌根治术患者，由于阴茎 中隔的存在，这种再生过程可能并不一定发生。因此，大鼠不适用于建立单侧CN损伤动物模型。 第二部分:海绵体神经损伤对大鼠阴茎组织nNOS和eNOS表达的影响 目的:探讨不同程度双侧CN损伤对阴茎组织nNOS和eNOS表达的影响。材料和方法:40只雄性成年SD大鼠，随机分成两组，即双侧CN挫伤组和双侧CN离断组，每组加只。在无菌状态下分别夹伤或切断大鼠的双侧CN，在术后当天(第0天)、第7天、第巧天、第30天每组每次各取5只大鼠，收集阴茎组织标本。免疫组织化学染色检测nNOS与eNOS蛋白在阴茎组织中表达情况，半定量RT一PCR检测nNOS与eNOS mRNA在阴茎组织中