农杆菌介导的RNAi抑制百合AG基因表达的研究

来源 :南京林业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:xiaozhenying
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
百合为百合科百合属多年生球根类单子叶植物,因花姿优美,成为世界五大鲜切花之一,但花型较为单一,野生的百合原种均为单瓣花,自然突变的重瓣百合很难找到。近年来,人们围绕着百合花形等方面的改良一直在努力。有研究表明,用RNAi方法抑制拟南芥C功能基因AG的表达,突变体表现为雄蕊瓣化,雌蕊则由另一朵花代替,从而呈现出重瓣花的表型。本研究以麝香百合“白狐狸”(White Fox)无菌鳞片为材料,将本实验室构建的LLAGMLIKE基因的ihpRNA干扰载体,用根癌农杆菌介导法导入百合中,试图用RNAi技术抑制百合AG基因的表达,以期获得相关表型的突变体,主要结果如下:1.获得麝香百合“白狐狸”(White Fox)外植体鳞片分化适宜培养基:MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L,鳞片的分化率达到95.5%,为开展遗传转化提供了技术基础。2.遗传转化中最佳选择压的确定:所用的筛选标记基因是HPT,在遗传转化中采用潮霉素作为选择筛选转化植株的选择剂。鳞片切片作转基因受体材料时,潮霉素浓度以8~10mg/L为宜。由于百合鳞片对潮霉素非常敏感,采用分步筛选逐步提高选择压力的方法,以确保有抗性芽的获得。3.试验研究了影响百合农杆菌介导遗传转化因素,初步建立了百合的遗传转化体系:(1)经过预培养3天的百合鳞片外植体转化目标基因,经选择性培养,筛选后的再生率最高;(2)通过不同浓度菌液对转化的影响试验得出,菌液浓度在OD600为0.8左右时浸染效果最好;(3)对于麝香百合鳞片而言,侵染时间控制在在25~35min为宜;(4)通过比较不同共培养时间下百合鳞片分化率的高低,得出3~4d为最佳共培养时间;(5)乙酰丁香酮能明显提高百合转化植株的再生频率,在共培养基上附加150μmol/L AS,可以提高农杆菌转化百合筛选的抗性植株再生率。4.本研究共得到潮霉素抗性植株5株,通过PCR检测和基因组的Southernblot分析表明,LLAGMLIKE RNA干扰基因整合到3株转基因植株的基因组中,Northern blot检测结果表明,转基因植株的AG基因表达量被有效降低。综上所述,本文通过将ihpRNA干扰载体用于百合花发育基因干扰作用的研究,通过百合鳞片再生和遗传转化方法研究,初步建立起了RNA干扰遗传转化体系,为今后RNAi技术在百合花型改良中的研究和应用提供了依据。
其他文献
乌东德水电站是金沙江下游河段规划建设的乌东德、白鹤滩、溪洛渡和向家坝四个电站中第一个梯级,装机容量8400MW,目前该电站进入筹建期。在项目前期的设计中,根据洪峰流量大、水