茶籽组织培养与无性系变异的研究

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茶树是重要的经济作物,有许多关于组织培养的研究报道,但关于茶树组织培养过程中产生无性系变异的研究尚未见报道。本文以不同品种茶籽为材料进行组织培养的研究,并就其再生体系的遗传变异进行了ISSR分析。本研究的主要结果如下:1.低温贮藏时间对茶籽分化不定芽和不定胚的影响茶籽低温(4℃)贮藏有利于子叶、子叶柄不定芽的分化;大多数试验品种的茶籽其分化不定芽的最佳贮藏时间为14d左右;茶籽采摘后,立即接种,不定胚分化率最高。茶籽一般有短暂的后熟期,其后熟过程可能是内在生理物质和胚性状态发生变化的过程,某些双极性细胞转变成单极性细胞。本研究表明茶籽低温(4℃)贮藏有利于加速后熟过程。2.不同品种茶籽其不定芽、不定胚分化的差异不同品种茶籽的不定芽和不定胚诱导率存在较大的差异,各有其分化不定芽和不定胚的最佳培养基。在低温贮藏14d后,安化圆叶不定芽、不定胚诱导率较高,在C6培养基上不定芽诱导率高达100%,在C4培养基上不定胚诱导率达66.7%;东湖早不定胚诱导率较高,在C3培养基上诱导率高达100%;在C8培养基上,槠叶齐和碧香早不定芽的诱导率高达100%;但槠叶齐没有诱导出不定胚。3.不同激素水平对外植体分化及胚状体再分化的影响培养基中添加TDZ、BA+IBA、BA+NAA,对不定芽和不定胚的诱导具有较好的促进作用。培养基中添加2,4-D,有利于未经低温贮藏或经短暂低温贮藏的茶籽诱导不定胚的发生,但在添加2,4-D的培养基上培养却很少能诱导出不定芽。在不同培养基上诱导胚状体的再分化存在一定的差异性。在添加TDZ的培养基上培养,能诱导出正常芽叶,且芽长势较好;在添加BA+IBA的培养基上培养,较易诱导不定芽和不定胚再分化;在添加TDZ的培养基、BA+较高浓度IBA组合的培养基上培养,胚状体先分化出愈伤组织,再分化出芽,未发现再分化出胚状体。试验结果还表明:当IBA浓度较高时诱导畸形芽分化,而IBA浓度较低时诱导正常芽分化。在添加BA和较低浓度IBA的培养基上培养,可直接诱导出畸形胚状体。4.组织培养中再生体系遗传变异的ISSR分析对组织培养诱导的再生体系进行ISSR分析。结果表明:不同激素水平诱导出的再生体系,其基因型存在差异;且不同激素诱导后的变异程度不同。其中2,4-D和IBA能引起再生植株产生较大的遗传变异,但并不是对所有的外植体都能起作用。同一品种同一颗茶籽的不同部位的变异程度都有所不同。这可能与外植体的生长、发育时期不同以及不同品种、外植体不同部位在不同时期对激素的敏感程度存在差异有关。TDZ在诱导变异过程中具有一定的作用,其作用机理在国内外的研究报道较少,有待进一步研究。
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