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AcMVPV LEF-10是一种病毒的晚期表达因子,对病毒晚期基因的表达起重要的调控作用。先前的研究发现,在原核细胞E.coli或真核细胞Sf9细胞中,LEF-10均会形成难解离的高分子量复合体,且这种复合体具有强烈抵抗SDS解聚的特性。这种现象罕见报道。本研究分为两部分,第一部分通过细胞生物学、免疫学技术观察并检测LEF-10的聚集现象及其聚集特性;第二部分通过酵母红白表型鉴定系统,对LEF-10的朊蛋白特性进行研究,通过一系列截断型突变体和氨基酸点突变型突变体对LEF-10的朊蛋白结构域与朊蛋白关键氨基酸位点进行鉴定。第一部分,本研究首先构建了vAc/P（lef-10）-LEF-10-His重组病毒,通过免疫荧光技术检测到,在被感染的Sf9细胞中,在其天然启动子调控下表达的LEF-10会形成点状聚集。接着,本研究对天然LEF-10的起始表达时间进行了研究。Western blot结果显示,LEF-10-GFP-His至晚从感染后8h开始表达,蛋白表达量逐渐增大。另外,在HEK 293T细胞中,双分子荧光互补技术证实,LEF-10自身与LEF-101-65自身及二者间均存在相互作用,再次验证了LEF-10的诱导聚集倾向。第二部分,LEF-1027-78的分子量质谱分析得知,LEF-1027-78以单体、二聚体、三聚体、四聚体的形式存在,这种多聚化特性与朊病毒的聚集现象有相似之处。对于LEF-10朊病毒的特性研究是通过酵母红/白表型鉴定系统进行的。该系统认为,白色菌落表型代表插入的蛋白质因含有PrD（Prion Domain）而发生聚集;而红色菌落表型代表插入的蛋白质因不含PrD而未发生聚集。pSup35N1-5MC质粒与敲除Sup35基因的LJ14酵母共同构成的酵母红白表型鉴定系统。首先,利用酵母红白表型鉴定出LEF-101-48、LEF-101-65、LEF-10均为Prion,且均能被盐酸胍不同程度低“治愈”。接着对LEF-10进行氨基酸序列分析,根据保守氨基酸位点的分布情况,将LEF-10分为三个保守结构域（C1、C2、C3）,再根据三个保守结构域构建5个截断型LEF-10(LEF-101-41、LEF-1035-62、LEF-1054-78、LEF-101-62、LEF-1035-78)。酵母红白表型鉴定结果表明,LEF-101-41（即C1区）产生聚集现象,含有朊病毒结构域。接着在LEF-101-41区域内进行更为精细的截断,构建了19个截断型LEF-10(LEF-101-34、LEF-101-33、LEF-1012-41、LEF-1012-34、LEF-1012-33、LEF-1013-41、LEF-1013-34、LEF-1013-33、LEF-1016-41、LEF-1016-34、LEF-1016-33、LEF-1014-32、LEF-1014-31、LEF-1014-30、LEF-1014-29、LEF-1015-32、LEF-1015-31、LEF-1015-30、LEF-1015-29,酵母红白表型鉴定结果表明,LEF-10的精确朊病毒结构域为LEF-1014-32。为了研究LEF-10朊蛋白的关键氨基酸,分别在LEF-10和LEF-101-41中对8个高度保守的氨基酸进行点突变,构建了16个点突变型LEF-10(LEF-101-41L12A、LEF-101-41I13A、LEF-101-41V16A、LEF-101-41N20A、LEF-101-41L21A、LEF-101-41I24A、LEF-101-41I29A、LEF-101-41V33A、LEF-10L12A、LEF-10I13A、LEF-10V16A、LEF-10N20A、LEF-10L21A、LEF-10I24A、LEF-10I29A、LEF-10V33A,经过酵母红白表型鉴定,点突变对LEF-10的聚集都产生了破坏作用,这种现象表明,这8个疏水氨基酸均为LEF-10的朊蛋白聚集关键氨基酸。综上所述,本研究基本证明LEF-10是一种类朊蛋白。先前报道的朊蛋白仅在哺乳动物及真菌中发现,本研究在病毒中首次发现类朊蛋白。本研究中的新发现拓展了类朊蛋白的概念范围,并为类朊蛋白是生物界普遍存在的现象这一假设提供了新的证据。本研究鉴定出LEF-10的朊蛋白结构域和朊蛋白关键氨基酸位点,从蛋白质二级结构角度初步解释了LEF-10强烈聚集倾向的成因,这为深入研究LEF-10的朊蛋白聚集特性及LEF-10在Ac MNPV生命活动中的功能奠定了一定的研究基础。