【摘 要】
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目的探讨笑气(N_2O)的声敏性及其声动力效应对肿瘤细胞的影响。方法采用新型荧光探针(singlet oxygen sensor green,SOSG)检测游离N_2O(f-N_2O)在水溶液中活性氧的生成。以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为实验对象,CCK-8法选择低强度聚焦超声(low intensity focused ultrasound,LIFU)辐照时间(50s,100s,150s,
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目的探讨笑气(N2O)的声敏性及其声动力效应对肿瘤细胞的影响。方法采用新型荧光探针(singlet oxygen sensor green,SOSG)检测游离N2O(f-N2O)在水溶液中活性氧的生成。以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为实验对象,CCK-8法选择低强度聚焦超声(low intensity focused ultrasound,LIFU)辐照时间(50s,100s,150s,200s),超声强度为2W/cm2。通过改良的机械振荡法制备载N2O微泡(N2O-mbs),并检测其基本特征,包括形态、粒径、电位、稳定性。CCK-8法检测N2O-mbs的细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察N2O-mbs与细胞的结合情况。SOSG法和DCFH-DA法分别检测N2O-mbs在水溶液和细胞内活性氧的生成。实验分组:空白对照组(Control)不作任何处理、N2O微泡组(N2O-mbs)仅加入载N2O微泡、C3F8微泡/阴性对照组(C3F8-mbs)仅加入C3F8微泡、单纯超声组(LIFU)仅超声辐照处理、载N2O微泡+超声组(LIFU-N2O-mbs)载N2O微泡结合超声辐照处理、C3F8微泡+超声组(LIFU-C3F8-mbs)C3F8微泡结合超声辐照处理。通过CCK-8法、流式细胞术、CAM/PI双染法检测N2O-mbs声动力效应对肿瘤细胞的影响。结果游离N2O在水溶液中活性氧检测结果为阴性(P>0.05);而加入N2O-mbs的水溶液经超声辐照后,SOSG检测结果显示荧光强度明显增强(P<0.01)。不同时间的低强度聚焦超声辐照后,50s组和100s组细胞存活率正常,150s组和200s组细胞存活率下降(P<0.05),结合氧自由基生成情况,选择100s为最佳辐照时长。成功制备的载N2O微泡水复溶后呈乳白色混悬液,大小均匀,形态规则,为类圆形,具有良好的分散性和稳定性,浓度约为(2.65±0.41)×108/ml,粒径为(458.10±17.26)nm,电位为(–16.20±0.35)mV。单纯N2O-mbs与肿瘤细胞共同孵育后,细胞存活率未见明显下降(P>0.05),共聚焦显微镜下可见细胞膜周围和细胞质内出现大量的微泡聚集。DCFH-DA检测结果显示吞噬N2O-mbs的肿瘤细胞经超声处理后,胞内可见明显增强的绿色荧光,荧光强度值与单纯超声组、C3F8阴性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。超声结合N2O-mbs处理后的肿瘤细胞,细胞存活率明显降低(44.10%);细胞凋亡率明显增加(68.33%),并出现大量细胞死亡(P<0.05)。结论笑气(N2O)在微泡包载条件下展现出显著的声敏性,其声动力效应可有效杀伤肿瘤细胞。
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