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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是存在于正常猪群上呼吸道的革拉泽氏病(Glasser’s disease)的病原体,引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的全身性严重疾病。HPS至少有15种抗原性和毒力的差异较大的血清型,其疫苗缺乏效果显著的交叉免疫保护力。而脂多糖作为病原菌的一种血清型特异的有效免疫原,可以刺激机体产生保护性免疫应答,但其免疫原性弱。若将多糖和载体蛋白进行化学结合而制成偶联疫苗能较大的提高免疫原性。不同于其它文献报道,本文未采用常用的蛋白如牛血清白蛋白(BSA)、破伤风类毒素等,而是采用副猪嗜血杆菌脂多糖与本实验实研究发现的具有良好免疫原性的副猪嗜血杆菌二型分泌系统四型菌毛蛋白PilA进行共价偶联,以取得更好的免疫效果和更强的保护力。本研究采用68℃热酚水法从副猪嗜血杆菌地方四型0322菌株及五型0165菌株分别提取脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)。经还原性实验及紫外光谱分析验证所提取的产物的主要成分即还原性的多糖。用酸水解法去掉带有毒性的脂质A部分,经葡聚糖凝胶层析预装凝SephadexG-75柱过柱纯化出脂多糖的主要结构单位——O-多糖侧链(O-specific polysaccharide, O-SP)。以己二酰二肼(ADH)为连接剂,将脂多糖经碳二亚胺(EDCA)活化后与PilA蛋白进行共价偶联,再经葡聚糖凝胶层析预装凝SephadexG-75柱过柱纯化,分别制得针对副猪嗜血杆菌0322菌株的OSP0322-PilA结合产物、针对副猪嗜血杆菌0165菌株的OSP0165-PilA结合产物和针对二者的混合产物OSP0322-PilA+OSP0165-PilA。用此三种结合产物分别免疫雌性BalB/C小鼠,并做副猪嗜血杆菌灭活苗和佐剂对照组。分别在第一次和第二次免疫后的第14天对小鼠进行尾部采血,用ELISA法检测血清的抗体OD630值。结果显示佐剂对照组免疫后,小鼠血清中没有抗LPS的IgG抗体产生,而用三组OSP-PilA免疫后小鼠血清中均产生了抗LPS的IgG抗体,且三组OSP-PilA免疫组在第二次免疫后第14天IgG抗体较第一次免疫后第14天的水平均有显著的提高,表明OSP-PilA结合产物具有良好的免疫原性。在第二次免疫后第14天分别用2×LD50和5×LD50的HPS0322和HPS0165对小鼠进行攻毒实验,结果显示OSP0322-PilA和OSP0165-PilA两组结合产物在攻毒剂量为5×LD50都表现较高的保护力。而OSP0322-PilA+OSP0165-PilA结合产物组的小鼠死亡率较大,不具备了良好的保护力。