玫瑰花渣化学成分及抗氧化、抑制酪氨酸酶活性研究

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大马士革玫瑰(Rosa Damascena Mill.)是提取玫瑰精油的优良品种,世界上很多国家都相继引进,但对提取精油后剩余的残渣处理较为粗放,既浪费了资源,又污染了环境。本论文主要研究了提取过精油的大马士革玫瑰花渣的化学成分,考察了不同萃取部位的抗氧化和抑制酪氨酸酶活性,并对活性部位的总酚含量(TPC)、指标成分的含量测定进行了研究。利用组织破碎提取法(闪式提取)代替传统的提取方法,以水为溶剂,提取液减压浓缩至比重为1.1左右,依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醇梯度萃取,得到三个萃取部位,分别为DRFR-A,DRFR-B和DRFR-C。利用硅胶和ODS等柱色谱分离纯化技术对活性部位DRFR-A的化学成分进行分离纯化。并用光谱方法和核磁共振技术鉴定了11个化合物,分别为胡萝卜苷(1),槲皮素(2),山奈酚(3),没食子酸(4),原儿茶酸(5),焦性没食子酸(6),2-Phenylethyl 3,4,5-trihydroxybenzoate(7),没食子酸甲酯(8),对羟基苯甲酸(9),对羟基苯乙醇(10)和紫云英苷(11)。其中,化合物1,6,7,9,10为首次从该植物中分离得到。为进一步开发利用玫瑰花渣,对其进行了抗氧化和抑制酪氨酸酶的活性评价。以自由基清除率为评价指标,VC为阳性对照,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基清除法对三个萃取部位进行抗氧化活性评价。结果表明,DRFR-A,DRFR-B和DRFR-C对DPPH自由基清除率的半数抑制浓度(IC50)分别为0.002760 mg/mL、0.004091 mg/mL、0.02214 mg/mL,对ABTS自由基清除率的半数抑制浓度(IC50)分别为0.002258 mg/mL、0.003970 mg/mL、0.02031 mg/mL,IC50分别为0.001672 mg/mL和0.002052 mg/mL。三个部位均有抗氧化活性,且抗氧化活性顺序为DRFR-A>DRFR-B>DRFR-C。并对抗氧化活性最好的乙酸乙酯部位(DRFR-A)进行了抑制酪氨酸酶活性评价,通过动力学方程,以曲酸为阳性对照,计算出它的IC50为200μg/mL(曲酸为5.6μg/mL),显示出其有较强的抑制酪氨酸酶能力。采用Folin-Ciocalteu法分别测定了DRFR-A,DRFR-B,DRFR-C以及总膏DRFR的总酚含量(Total Phenolic Content,TPC)。结果显示:其TPC分别为637.3±14.6、422.5±9.3、124.6±2.5、386.4±6.5 mg GAE/g。此结果与三个部位的抗氧化活性顺序一致,二者成正相关。对指标性成分没食子酸进行含量测定,检测条件为:Innovation Explorer C18(25 cm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5%磷酸梯度洗脱;温度为30℃;流速为0.8 mL/min;检测波长250 nm;进样量:10μL;结果:没食子酸标准曲线为C=0.8123S-0.0128,R2=0.9992。没食子酸在01 mg/mL范围内线性关系良好。HPLC法的精密度RSD为0.4203%,平均回收率为100.006%,其RSD为2.17%,测得玫瑰渣中的没食子酸含量为5.12%。此RP-HPLC法快速简单,稳定可靠,专属性强。本论文对大马士革玫瑰进行了深入系统的研究,提取分离方法具有节约、环保、高效的特点,分离纯化11个单体化合物,其中5个为首次分到,为玫瑰花渣的进一步研究奠定了理论基础。抗氧化和抑制酪氨酸酶活性评价简单易操作,这为食品抗氧化剂和美白化妆品的开发提供了科学依据。玫瑰花渣中总酚(TPC)及指标性成分含量测定方法稳定可靠、专属性强,这对于快速测定其总酚含量以及其质量控制具有一定的参考价值。
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