【摘 要】
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核酸适配体是一段可以高亲和力和高特异性结合靶标的单链DNA或RNA,具有尺寸小,稳定性高,容易化学合成及修饰等优点,与多种分析技术相结合,广泛用于食品安全和环境监测分析技
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核酸适配体是一段可以高亲和力和高特异性结合靶标的单链DNA或RNA,具有尺寸小,稳定性高,容易化学合成及修饰等优点,与多种分析技术相结合,广泛用于食品安全和环境监测分析技术研究。本研究首先结合适配体和试纸条技术,开发了特异性检测赭曲霉毒素A的荧光试纸条;其次基于荧光共振能量转移原理,建立了雌二醇快速灵敏检测方法;最后通过对适配体序列长度对比分析研究,建立了孕酮的纳米金比色快速检测方法。主要研究内容如下:1.基于赭曲霉毒素A和适配体互补链竞争性地结合适配体这一原理,选择稳定性好、荧光强度高和发射波长范围广的荧光素Cy5作为信号标记物,建立了用于检测玉米中赭曲霉毒素A的竞争模式的荧光适配体试纸条。该方法定量检测赭曲霉毒素A的有效浓度范围是1 ng/mL-1000ng/mL(R~2=0.972),检测限为0.4 ng/mL,在玉米样品中的加标回收率为96.4%-104.7%,相对标准偏差为4.8%-6.4%,方法具有较好的灵敏度、准确度和稳定性。该研究为谷物中赭曲霉毒素A的检测提供了新型快速的检测技术手段。2.利用荧光基团FAM标记的适配体和淬灭基团BHQ1标记的互补链,基于荧光共振能量转移原理,建立了一种基于适配体的“Turn on”模式的快速检测雌二醇的荧光检测方法。在雌二醇浓度0.1 ng/mL-10μg/mL范围内,线性关系良好(R~2=0.985)。该方法在实际样品自来水、环境水、尿液和牛奶中的加标回收率分别是98.0%–101.7%、99.0%–103.6%、99.0%–102.5%和103.8%–105.0%,相对标准偏差分别是2.8%-3.8%、3.9%-5.4%、5.4%-9.0%和10.3%-14.3%。该方法实际样品前处理操作简单,仅需过滤、离心即可,并且可以用于三种不同类型的基质中雌二醇的检测,具有良好的稳定性和精确度。本研究为环境和食品中的雌二醇检测提供新的检测手段,也为基于适配体-互补链的检测雌二醇的竞争模式试纸条研究提供了一些研究思路。3.建立了基于不同长度适配体的孕酮的纳米金比色快速检测方法,对比分析了两条适配体亲和力及对纳米金比色法灵敏度的影响。研究结果发现基于25mer适配体方法灵敏度是60mer适配体检测方法的5倍,60mer适配体链过长,适配体与孕酮结合后,冗余的碱基依然吸附在纳米金颗粒表面,降低了响应灵敏度。两个适配体纳米金比色法在各自检测浓度范围内均呈现良好的线性关系(线性相关系数R~2>0.9),在河水实际样品中加标回收率测定结果良好,且方法的准确度较好(RSD<6.5%)。虽然该方法的灵敏度有待提高,但目前基于适配体的孕酮检测方法研究较少,本研究为进一步进行适配体改造,建立更灵敏的孕酮检测方法提供了新的思路。
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