目的：筛选以2-甲氧雌二醇为基础的新结构的新生血管抑制剂和研究2-甲氧雌二醇对子宫内膜VEGF表达的影响并初步探讨其作用机制。 方法：1．剪开脐动脉以避免血细胞污染、胶原酶灌注消化，并给予充足的营养，体外分离、培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。2．建立两种新生血管抑制剂筛药模型：HUVEC增殖抑制试验以及鸡胚绒毛尿囊膜试验，并筛选药物。3．采用胶原酶消化，200目的尼龙筛过滤，传代2次，体外分离、培养正常人子宫内膜基质细胞；同时采用醋酸甲地孕酮(MPA)及双丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP)诱导蜕膜化，形成蜕膜化子宫内膜基质细胞。4．子宫内膜基质细胞接种后，分别加入1、10、50μmol/L浓度的2-甲氧雌二醇，空白对照组不加药，继续培养48小时，然后用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法，分析2-甲氧雌二醇对VEGF分泌的影响，并用实时定量RF-PCR法从mRNA水平对结果进行验证。5．向蜕膜化子宫内膜基质细胞中分别加入1、10、50μmol/L 浓度的2-甲氧雌二醇，空白对照组不加药，继续培养48小时，然后用ELISA方法，分析2-甲氧雌二醇对VEGF分泌的影响，并用实时定量RT-PCR法从mRNA水平对结果进行验证。6．免疫细胞化学方法分析2-甲氧雌二醇对子宫内膜基质细胞和蜕膜化子宫内膜基质细胞雌激素受体(ER)表达的影响。 结果：1．体外分离、培养HUVEC，纯度达99％。2．成功建立鸡胚绒毛尿囊膜试验模型；HUVEC增殖抑制试验确定了2-甲氧雌二醇IC<,50>=0.9312 μmol/L，且结果与文献报道(0.84 μmol/L)接近。目前尚未筛出活性与2-甲氧雌二醇类似或优于2-甲氧雌二醇的目标化合物。3．成功培养人子宫内膜细胞；传2代后，子宫内膜基质细胞纯度较高，此时诱导蜕膜化，可见不仅细胞形态发生改变，且能合成和分泌催乳素(PRL)。4．低剂量2-甲氧雌二醇能降低子宫内膜基质细胞上清液中VEGF水平(P<0.05)；中剂量虽然能降低上清液中VEGF水平，但无统计学意义；高剂量时子宫内膜基质细胞上清液中VEGF水平较对照组升高，亦无统计学意义。实时定量RT-PCR验证分析的结果和ELISA结果一致。5．低、中剂量的2-甲氧雌二醇可以降低蜕膜化子宫内膜基质细胞上清液中VEGF水平(P<0.05)；而高剂量则显著降低上清液中VEGF水平(P<0.01)。实时定量RF-PCR验证分析的结果和ELISA结果一致。6．免疫细胞化学分析结果显示，三个浓度的2-甲氧雌二醇对子宫内膜基质细胞和蜕膜化子宫内膜基质细胞ER表达均无影响。 结论：1.2-甲氧雌二醇可以抑制鸡胚绒毛尿囊膜试验模型中的血管生成；HUVEC增殖抑制试验确定了2-甲氧雌二醇IC<,50>=0.9312μmol/L，且结果与文献报道(0.84μmol/L)接近，结合子宫内膜基质细胞排除细胞毒性结果，再次确认了2-甲氧雌二醇的抑制新生血管形成活性，同时也证实两种筛药模型的建立。2.目前已成功合成了两类保留2-甲氧雌二醇活性必需基团的与雌激素骨架相似的非甾体化合物，但在加上米非司酮抗孕激素受体基团这一步骤上出现困难，故尚未获得目标化合物。3.2-甲氧雌二醇低中剂量能稍降低子宫内膜基质细胞分泌VEGF水平，高剂量时则稍促进VEGF分泌，但影响程度均不大；提示2-甲氧雌二醇对静止细胞功能影响较小。4.采用MPA和db-cAMP诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化，模拟人体正常的蜕膜化过程。子宫内膜基质细胞蜕膜化后，不仅细胞形态发生改变，而且能合成和分泌PRL，均证明子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的发生。5.2-甲氧雌二醇低中剂量即降低蜕膜化子宫内膜基质细胞分泌VEGF水平；而高剂量则显著抑制VEGF的分泌。众所周知，血管生成是胚泡植入的关键步骤，而VEGF又在血管生成过程中发挥重要作用，因此上述结果提示该药可通过抑制VEGF而影响胚泡植入及妊娠维持，从而发挥抗早孕作用。同时2-甲氧雌二醇不影响蜕膜化子宫内膜基质细胞ER表达，因此上述作用不是通过影响ER表达而发挥作用的，提示2-甲氧雌二醇作用后并不影响雌激素的分泌及其相关效应，推测由此引发的不良反应减少。传统的抗早孕药物均依靠影响雌孕激素的分泌或作用而发挥作用，长期服用不良反应较大，限制了其广泛应用。新生血管抑制剂与常规的激素治疗相比，具有很多优点，如疗效好，不良反应小等，在不远的将来也许会成为一种新的抗早孕方法。